一、BCA法检测原理
BCA(Bicinchoninic acid)法蛋白浓度定量试剂盒是常用的蛋白浓度检测方法之一。众所周知，二价铜离子在碱性的条件下，可以被蛋白质还原成一价铜离子（biuret reaction），一价铜离子和独特的BCA Solution A（含有BCA）相互作用产生敏感的颜色反应。两分子的BCA螯合一个铜离子，形成紫色的反应复合物。该水溶性的复合物在562nm处显示强烈的吸光性，吸光度和蛋白浓度在广泛范围内有良好的线性关系，因此根据吸光值可以推算出蛋白浓度。
BCA反应原理图
图源：北京英文特生物
二、BCA蛋白浓度测定试剂盒的特点
1．步骤简单，45分钟内完成测定，比经典的Lowry法快4倍而且更加方便。
2．灵敏度高，检测浓度下限达到25μg/ml，最小检测蛋白量达到0.5μg，待测样品体积为1-20μl 。
3．BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的去污剂等化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween-20, 60, 80。
4．在20-2000μg/ml浓度范围内有良好的线性关系。
5. 检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。
注意事项：
1.长期不用时，Cu试剂与PBS稀释液可置于2-8℃保存，如发现细菌污染则应丢弃。BCA试剂在低温条件下出现结晶沉淀时，可37℃温育使其完全溶解, 不影响使用。
2.样品中若含有较多干扰物质时，请采用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
3.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
4. 常用浓度的去垢剂SDS，Triton X-100，Tween不影响检测结果，但受螯合剂(EDTA, EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可试用考马斯亮蓝（Bradford）蛋白浓度测定试剂盒。
捷倍斯生物公司的 GBCBIO® BCA蛋白浓度测定试剂盒（G3522) BCA Protein Assay Kit BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20,60,80。但受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于1mM，β-巯基乙醇低于0.01%。不适用BCA法时建议试用GBCBIO 生产的Bradford蛋白浓度测定试剂盒(G3155)。
产品特点：
○灵敏度高，检测浓度下限达到25μg/ml，检测下限达到0.5μg
○在50-2000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系
○受样品中离子与去污剂的影响小
○可用酶标仪或分光光度计进行检测
部分相关论文：
1 .Yiqing Sun et al.Front Physiol. 2018; 9: 837. Change in Ubiquitin Proteasome System of Grass Carp Ctenopharyngodon idellus Reared in the Different Stocking Densities.(BCA Protein Assay Kit, RIPA Lysis Buffer)
2. Yang S， et al. Inhibition of microRNA-376b Protects Against Renal Interstitial Fibrosis via Inducing Macrophage Autophagy by Upregulating Atg5 in Mice with Chronic Kidney Disease. (BCA Protein Assay Kit)
3. LncRNA HAND2‐AS1 exerts anti‐oncogenic effects on ovarian cancer via restoration of BCL2L11 as a sponge of microRNA‐340‐5p. (BCA Protein Assay Kit)...
| 货号 | 产品名称 |
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BCA Protein Assay Kit BCA蛋白浓度测定试剂盒 |
产品介绍:
https://www.gbcbio.cn/Product/G3522.html
三、BCA法常见问题及解决方案
| 问题现象 | 可能原因 | 解决方案 |
|---|---|---|
| 标准曲线不线性 |
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| 吸光值偏高 |
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| 吸光值偏低 |
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| 重复性差 |
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| 背景信号高 |
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| 颜色变化异常 |
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四、BCA法注意事项
干扰物质：
强还原剂：DTT、巯基乙醇等需浓度<1 mM。
去垢剂：SDS浓度<0.1%，Triton X-100浓度<0.5%。
脂类/核酸：高浓度可能导致干扰，建议预处理（如氯仿抽提）。
操作优化：
孵育时间：严格按说明书操作，温度波动±2℃可能影响结果。
比色皿清洁：避免残留清洁剂，使用后立即冲洗。
试剂保存：
BCA原液避光4℃保存（有效期12个月），工作液现配现用。
五、BCA法与其他方法的对比
| 方法 | 优点 | 缺点 |
|---|---|---|
| BCA法 |
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| Bradford法 |
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| Lowry法 |
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BCA法通过灵敏的显色反应实现蛋白定量，广泛适用于含去垢剂的样本（如裂解液）。实验成功的关键在于标准曲线的准确性和干扰物质的控制。若遇异常结果，优先排查还原剂、浓度范围及操作误差。对于复杂样本，可结合透析或沉淀法预处理以提高准确性。
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捷倍斯生物可以提供专业和完善的核酸分离纯化解决方案，有硅胶柱法、磁珠法与溶液直接法的核酸纯化产品，在二代测序的样品前处理方面有着专业的技术与积累，有完善的针对唾液、血液与血浆等样品的保存、运输与高通量核酸纯化等整套的解决方案。 在诊断试剂原料方面，捷倍斯生物可以提供生物染色剂、高端的表面活性剂、显色底物、生物缓冲剂以及酶制剂与其稳定剂等系列产品。
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