作为多民族的人口大国,我国具有独特的人类遗传资源优势,拥有丰富的特色健康长寿人群、特殊生态环境人群、地理隔离人群以及疾病核心家系等遗传资源,
单独一管血样看似没有“特殊价值”,其实每一份都蕴含着宝贵的基因数据。在生物大数据时代,大量血样一旦汇聚,承载着不可估量的“生命密码”,一经非法出境,将直接威胁十四亿人口的生物安全。那么血液到底由什么构成?境外机构和不法分子又能通过血液获取哪些信息?
1 血浆(约占血液体积的55%)
血浆是血液的液体部分,呈淡黄色,主要成分包括:
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| 水 |
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| 蛋白质 |
•白蛋白(维持胶体渗透压) •球蛋白(包括免疫球蛋白,参与免疫) •纤维蛋白原(参与凝血) |
| 电解质 |
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| 营养物质 |
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| 代谢废物 |
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| 激素与气体 |
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2 血细胞(约占血液体积的45%,又称“有形成分”)
血细胞由骨髓造血干细胞分化而来,分为三大类:
红细胞(Red Blood Cells, RBCs)
白细胞(White Blood Cells, WBCs)
血小板(Platelets,或称血栓细胞)
3 其他微量成分
孕妇血液游离DNA检测有哪些应用?
产前诊断:无创产前检测(NIPT)
- 胎儿染色体异常筛查:孕妇血液中存在少量胎儿来源的 cfDNA(约占母体 cfDNA 的 3%~13%),通过对这些 cfDNA 进行高通量测序,可准确检测胎儿是否患有常见的染色体非整倍体疾病,如 21 - 三体综合征(唐氏综合征)、18 - 三体综合征、13 - 三体综合征等。
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相比传统的羊水穿刺等有创检测,NIPT 具有无创、安全(避免流产风险)、高准确率等优势,已成为临床常规产前筛查手段。
(以GBCBIO-D2205 无细胞游离DNA提取试剂盒为例)以下操作以1000μl 液体样品为例,更大的样品处理量,请将试剂按比例增加。
1.取1000μl 血清、血浆或者其他无细胞液体样品置于2ml离心管中。
2.加入1000μl Buffer BL 、20μl Protease K,最高速度涡旋15秒充分混匀。
3. 65℃水浴10分钟。孵育过程中短暂涡旋管子一次。
4. 加入1000ul无水乙醇(96-100%,室温)至裂解液中,最高速度涡旋20秒混匀。将柱子稍微离心以收集盖子上的液滴。
5. 把GBC吸附柱装在在2ml收集管中(已提供),取第4步得到的溶液700μl转入柱中,10,000×g
离心30秒,倒弃流出液重新套上收集管。
6.重复第五步,直至第四步的所有溶液过柱完毕。
温馨提示:第五、六步建议用真空泵替代离心操作,滤过更快。
7.加入500μl Buffer WB至柱子中,10,000×g离心30秒,弃去流出液。
7. 将GBC吸附柱重新套回2ml收集管中,加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,10,000×g离心
1min,倒弃流出液;
注意:DNA Wash Buffer使用前须要用无水乙醇稀释。如果放入冰箱中,使用前须恢复到室温。
8.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中,8,000×g离心1min,弃去流出液;
9. 将GBC吸附柱重新套回2ml收集管中,最大转速(>13.000×g)离心空结合柱1min以干燥柱子
的基质;这一步对下面的洗脱步骤至关重要。
10. 将柱子置于1.5ml灭菌离心管,加入50-100μl TE或灭菌去离子水至柱子的膜中央,室温静置于2min;
11. 室温下,离心(>13.000)1min,以洗脱DNA。保留含DNA流出液。将DNA储于-20℃。
注意:为增加得率,可将离心得到的溶液再加入吸附柱中,室温放置2分钟,1,2000rpm离心2分钟。
磁珠法cfDNA提取步骤
(以GBCBIO-M2105 磁珠法细胞游离DNA提取试剂盒 为例)该方案采用手工操作流程,适合于从500µl血浆等液体中提取核酸,样品体积小于500µl请用ddH2O补足至500µl。自动方案根据不同的机器匹配相应的程序即可。
1.在1.5ml离心管中,加入15µl Proteinase K、35µl Bufer CFL。
注:根据样品的个数,可预先将Proteinase K与Buffer CFL按比例混匀,以减少加液的次数,预混后每样加50µl预混液。如果样品体积大于500µl,Proteinase K与 Buffer CFL的量要相应增加。
2.转移500µl血清等液体样品至含Proteinase K与 Buffer CFL的离心管中。
注:如果样品体积小于500µl,请用灭菌去离子水补足到500µl。
3.涡旋混匀15秒。65℃放置10-20分钟,其间颠倒混匀次数。
4.向消化好样品管中加入500µl Buffer MBD(Buffer MBD第一次使用前需用异丙醇稀释, Buffer MBD的体积与样品一致)与20µl MagIso Beads,涡旋混匀,室温放置3-5分钟,期间颠倒几次。
注:根据样品的个数,可预先将Buffer MBD与MagIso Beads预混好,并加入500µl。
....产品链接:https://www.gbcbio.cn/Product/M2105-50.html
| 货号 | 产品名称 |
|---|---|
| D1105 | Blood DNA Kit 血液DNA提取试剂盒 |
| D1115 | Blood Clot DNA Kit 血凝块DNA提取试剂盒 |
| D1305 |
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| M3115 | Fast MagIso Blood DNA Isolation Kit 快速磁珠法血液DNA提取试剂盒 |
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品牌优势
捷倍斯生物可以提供专业和完善的核酸分离纯化解决方案,有硅胶柱法、磁珠法与溶液直接法的核酸纯化产品,在二代测序的样品前处理方面有着专业的技术与积累,有完善的针对唾液、血液与血浆等样品的保存、运输与高通量核酸纯化等整套的解决方案。 在诊断试剂原料方面,捷倍斯生物可以提供生物染色剂、高端的表面活性剂、显色底物、生物缓冲剂以及酶制剂与其稳定剂等系列产品。
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