1、Q:CBA中使用的微球是由什么做的?所使用到的微球的平均半径是多少?
A:CBA中使用的微球的原料是聚苯乙烯,约7.5um(与淋巴细胞直径相接近),作为固相物可在流式细胞仪上被检测。
2、Q:CBA的灵敏度是多少?做CBA时所需样本量是多少?
A:可以达到0.274pg/mL,高敏级别的ES Flex set可以达到fg级别;25~50ul,一份样本可以同时检测多个指标。
3、Q:CBA实验需要做副孔吗?
A:不需要。
4、Q:CBA Flex set最多可以同时检测多少个指标?
A:可做单个指标,做多可同时做30个指标。
5、Q:CBA实验对流式细胞仪有什么要求?
A:至少需要一个488nm激光器及两个荧光参数的接收流式细胞仪。
6、Q:一次CBA实验需要多长时间?
A:一般1~1.5小时左右。
7、Q:是否需要相对应的特定分析软件?
A:免费的分析软件FCAP3.01。
8、Q:在CBA实验分析中应该使用何种型号的实验管?
A:除了FACSArray外,我们建议使用12*75mm,5mL的聚苯乙烯管(BD Falcon Cat No:352008)。
9、Q:CBA的检测结果是否可直接与ELISA的分析结果进行对比?
A:不可以。因为CBA是基于荧光的报告系统实现的,虽然CBA系统相对于ELISA分析具有良好的优势,能够提供更高的敏感性和更大的浓度检测范围。但是两者得出的实验数据不能够直接比较,需对CBA的数据通过和已有的ELISA数据校正,得到两者的相关性结果。
10、Q:标准曲线不理想,原因是什么?
A:1)CBA试剂盒中所提供的标准样品是蛋白冻干粉,由于大部分的标准样品属细胞因子类的敏感型蛋白,在重悬标准样品成溶液或进行标准样品稀释时,不可采用振动混匀及剧烈吹打的方式处理标准样品,在重悬标准样品成溶液时,在加入溶液后,只需放于室温下平衡15分钟即可。在进行标准样品系列稀释时,只需轻轻吹打样品数次即可。否则,由于制成溶液后的标准样品不稳定,经剧烈混匀后易降解失活,影响试验中标准曲线的拟制;
2)不管是标准品储备液(X10)或实验中的稀释液中,标准品在配置成溶液后不稳定,在配置成储备液(X10)的12小时后将不能再使用。每次实验前都要重新配置新的标准品溶液;
3)在加入检测试剂时,需严格遵守试剂盒的要求规范操作(如:精确的加液),因为添加的微球数量不准确会改变有效捕获面积,从而影响检测的敏感性和准确性。
11、Q:目前CBA的应用范围?
A:肿瘤研究及肿瘤疾病的辅助诊断、疗效和预后监测;干细胞研究和干细胞治疗监测;免疫学研究和免疫疾病的辅助和诊断监控;感染疾病的研究及辅助诊断和疗效评价;免疫功能监测;药效评价、药物研究、疫苗研究;细胞信号传导中磷酸化蛋白、凋亡相关蛋白定量分析。
12、Q:标准品/样本MFI过低的原因是什么?
A:1)反应温度低;
2)反应时间短;
3)样本过度稀释;
4)操作过程中未避光。
13、Q:CBA使用的样本检测类型?
A:血清、血浆、眼泪、房水、唾液、体腔灌洗液、细胞培养上清、细胞裂解液等。
14、Q:如果我们没有流式细胞仪,有解决方案吗?
A:广州赛哲科技有限公司提供CBA实验服务,可联系020-34397703;market-szkj@sagene.com.cn

