Corning® Matrigel® Matrix

康宁基质胶使用指南

1. 基质胶的来源和组成

基质胶是从富含胞外基质蛋白的EHS小鼠肿瘤中提取的基底膜基质，其中含有60%的层粘连蛋白、30%的IV型胶原和8%的巢蛋白。巢蛋白是层粘连蛋白和IV型胶原相互作用的桥梁，并且有利于基底膜基质分子间的结构组成。基质胶还包含基底膜聚糖、TGF-β、表皮生长因子、胰岛素样生长因子、成纤维细胞生长因子、组织纤溶酶原激活物和一些EHS肿瘤中天然存在的生长因子以及源自肿瘤细胞的金属蛋白酶。

2. 如何选择合适的基质胶

²  普通标准型基质胶：蛋白浓度8-12mg/mL，含酚红，可用于一般细胞的培养分化，包括2D和3D培养，细胞侵袭等实验；

²  Phenol red-free即无酚红的基质胶：主要用于荧光检测等光学颜色方面的研究，消除酚红指示剂的干扰，如使用荧光染料或Drabkins法计数内皮细胞成管实验。对于子宫内膜细胞培养，也需使用无酚红基质胶。此外，酚红和非甾体雌激素结构类似，有类雌激素效应。在实验动物体内可能具有干扰内分泌和荷尔蒙代谢的能力；

²  GFR即低生长因子的基质胶：主要作用是排除生长因子对实验的干扰，适用于对基底膜制备要求较高的研究应用，比如用于管状骨细胞研究的信号优化，同时也用于原代小鼠哺乳上皮细胞的基因表达研究；

²  High Concentration (HC)即高浓度基质胶：蛋白浓度18-21mg/mL，有利于肿瘤的迅速增殖，主要用于血管生成实验，免疫小鼠注射（肿瘤模型的建立）；

²  hESC-qualified Matrigel Matrix：专用于人胚胎干细胞的培养，也可用于诱导型多能干细胞的培养。 

3. 基质胶的颜色变化

由于二氧化碳与碳酸氢盐缓冲液和酚红的相互作用，冰冻或者解冻状态下的基质胶颜色会在橙黄色到深红色之间变化。酚红在-20℃或者pH酸性条件下呈亮黄色，在-20℃-0℃无色，在生理pH和0℃以上呈红色。这些颜色之间的变化是正常现象，不影响产品功效，置于5% CO₂平衡后颜色差异会消失。

4. 基质胶的冻融、分装和保存

冻融：将基质胶埋于铺满碎冰的冰盒中，然后将整冰盒放入4℃冰箱中过夜融解（基质胶的冻融时间跟其蛋白浓度相关，蛋白浓度高则需要时间较长）。

分装：冻融后的基质胶须分装保存，以避免反复冻融。液态基质较会在10℃及以上快速成胶（特别是高浓度基质胶），因此，分装时基质胶所接触到的耗材必须预冷，并且整个实验必须无菌、冰上操作。（高浓度的基质胶比较粘稠，用移液器不好吸取，可以使用去掉针头的预冷注射器吸取）

保存：分装后的基质胶在冰上应仍呈液态，此时将基质胶放进 -20℃保存即可。进行实验时，取出分装好的小管，4℃冻融。若分装好后基质胶已经凝固，说明分装操作不能很好的保持低温，导致基质胶已经成胶，不适宜使用。另外，注意不要将基质胶保存于具有自动除霜功能的冰箱中，因为冰箱除霜过程中升温，可能使基质胶成胶。

5. 基质胶的稀释

使用预冷的无血清培养基或者pH 7.4的PBS稀释基质胶。

6. 如何从基质胶中收回细胞

推荐使用Corning Dispase（货号：354235）或Corning Cell Recovery Solution（货号：354253）来收获培养在基质胶中的细胞。

Corning Dispase相比胰酶、胶原酶或其他蛋白水解酶能够更温和有效地获得单细胞悬液，不会损伤细胞或细胞表面蛋白。对于需要继续接种培养或进行检测的细胞，使用Corning Dispase不会产生损伤。此外，Corning Dispase也可用于组织分离。

对于代谢研究和RNA抽提，建议在4℃使用Corning Cell Recovery Solution进行非酶反应的细胞收获。因为基质胶中含有痕量的RNA，进行RNA分析时，应设一个基质胶（不接种细胞）的对照组。

7. 关于基质胶中LDEV-free的说明

LDEV是指乳酸脱氢酶增高病毒，基质胶在生产过程中均须进行病原体检测，故基质胶中不含LDEV、LDHV（乳酸脱氢酶增生病毒）等病原体。

8. 基质胶是否会有自发荧光

基质胶是一种蛋白混合物，经过透析处理后融解在DMEM培养基中，为防止微生物污染，培养基中添加了庆大霉素，所以基质胶可能引发荧光的组分包括其中的蛋白质成分，维生素成分以及庆大霉素（氨基糖苷类抗生素）。如果需要使用荧光检测细胞生长状态，建议使用者建立对照实验，在所需要的波长条件下进行对比，以排除背景荧光。