操作：65度烤箱中烤60分钟。
作用：烤片也叫作贴片，主要作用是防止组织从玻片上掉落，对于容易掉组织的切片可以延长时间和提高温度。
操作：脱蜡液（二甲苯或环保脱蜡液）三缸，每缸10分钟。
作用：去掉包埋在组织上的石蜡。
操作：梯度酒精四缸，100%，100%，95%，75%。每缸2分钟。纯化水浸泡2分钟。
作用：前面两缸100%酒精用于去玻片和组织上的脱蜡液（脱蜡液一般跟水是不相溶的），后面两缸是让水份快速进入组织细胞。
操作：3%过氧化氢浸泡5分钟，PBS（磷酸盐缓冲液）浸泡2分钟。
作用：破坏组织上的内源性过氧化物酶（如红细胞），以免DAB显色时出现非特异显色。
根据一抗说明书选择合适的修复方式，如酶修复，热修复，热修复分为EDTA和CBS修复。以下操作以EDTA热进行说明。
操作：修复盒中加入EDTA修复液，放入玻片，将修复盒放入100度水浴20分钟，或120度的高压环境中2-3分钟，离开热源，自然降温，PBS浸泡2分钟。
作用：组织的前期处理经过了10%中性福尔马林（多聚甲醛）浸泡，多聚甲醛可以跟抗原上的氨基结合，同时也会使用蛋白质之间发生胶联，封闭了抗原决定簇，抗原修复的主要作用是让抗原决定簇充分暴露，以便于下一步跟分抗结合。
操作：在玻片上画上阻水圈，滴加50ul一抗复盖组织，保湿盒中室温60分钟或4度过夜。PBS浸泡三次，每次3分钟。
作用：让一抗跟组织上的抗原充分结合。阻水圈是为了防止孵育时一抗向玻片的其它地方扩散，保温盒是为了防止在孵育期间一抗挥发引起的抗体浓度过高或干掉。PBS浸泡是为了去掉没有结合的一抗，防止后面出现非特异性着色。
操作：滴加50ul二抗复盖组，保湿盒中，室温20分钟，PBS浸泡3次，每次3分钟。
作用：让二抗跟一抗充分结合。PBS浸泡去掉没有结合的二抗。
操作：滴加50ulDAB工作液（需现配现用，配制方法按DAB说明书进行操作），复盖组织，浸染5分钟。纯化水冲清中止显色反应。
说明：二抗中的过氧化物酶氧化DAB形成棕黄色沉淀。
操作：滴加50ul苏木素复盖组织，浸染3分钟，纯化水冲洗，滴加50ul酸洗液1-2秒，纯水化冲洗。流水冲冼3分钟返蓝。（根据苏木素明书操作，部份苏木素配方是不需要酸洗的）作用：将细胞核染成蓝色。
操作：梯度酒精75%，95%，100%每缸2分钟，透明液浸泡3分钟。取出玻片凉干，滴上中性树脂，盖上盖玻片，轻压盖玻赶出汽泡。
作用：保存染色效果。
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