脱水是石蜡切片制作中的一个重要环节。在经过固定步骤后,组织会含有大量水分,而水与石蜡又不能相混,必须先用脱水剂渗透到组织中,将组织中水分全部去掉。组织块脱水是否完全,会直接影响制片效果。但是,在病理制片中经常发生因脱水不好而出现各种问题,本期我们将分享脱水过程中常见问题及应对方法。
脱水要点
将组织内水脱干净但又不能使组织过分脱水。
脱水剂自低浓度至高浓度进行,否则造成组织强烈收缩或发生变形,不利于包埋和切片。
小组织,应单独设置脱水程序,最好不要与大组织同时进行脱水。
乙醇是最常用的脱水剂,脱水力强,能使组织硬化,并能与二甲苯较好的融合,但容易使组织收缩、变脆,尤其无水乙醇为最甚。不要让组织在高浓度乙醇中停留时间过长或温度过高。
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原理:乙醇脱水能力在60%-95%浓度之间是相对稳定,低于60%的乙醇脱水能力下降明显,初始乙醇浓度低于50%,会很快失去脱水效应。建议及时更换。
如何判断脱水出问题
脱水不好,标本会出现两种情况
(1)脱水不足。组织在包埋蜡块中呈现与石蜡硬度不一的现象,结果是虽能切出蜡带,但蜡带中组织不成片。因为脱水不净,透明剂与石蜡都无法浸入组织当中,形成了没有浸蜡的组织蜡块。
(2)脱水过度。组织因为脱水过度(脱水剂太强、脱水温度过高、脱水时间太长等)致使组织细胞结构发生不可逆的变化,即使透明剂和石蜡都顺利浸透组织,但因组织本身已遭破坏,切出的片子也是很糟糕的,呈现组织细胞碎裂,收缩变形的现象。
影响脱水效果的因素有哪些?
(1)人工脱水操作,每一步需要人来完成,稍有不慎,就会在时间上有所延误,脱水处理时间不是很精准。
(2)自动脱水机操作,在脱水时,大小组织一起脱水,会造成小组织过度处理,产生硬脆现象,而太大的组织又处理不够,难以切出好片。
组织脱水后出现发脆的原因是什么?
(1)脱水过度。一般认为组织发脆跟高浓度乙醇有关,忽视了与低浓度的乙醇关系。其实低浓度乙醇具有强大穿透力,比纯乙醇更容易渗透到组织块内部使之脱水。组织如果在低浓度乙醇里充分脱水,在高浓度乙醇里只需脱去从低浓度到高浓度之间的水分,仅需短时间就可完成。脱水过度引起组织发脆可能是起始脱水浓度过高引起。
(2)脱水中加温,且温度超过36℃;脱水剂内加有丙酮也会造成组织发脆。
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