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在开始做实验之前，我带师妹加鞘液，师妹问我，鞘液的作用是什么，我只知道流式细胞仪的运行离不开鞘液，也知道鞘液会带动细胞流动，但其他的作用就不太答得上来了……
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鞘液确实很重要，它相当于流式细胞仪的“血液”。它的一个重要功能是聚焦细胞的流动，鞘液和样本流速有差异，鞘液的流速是高于样本的流速，因此鞘液和样本之间存在压力差，通过伯努利效应可对样本流进行聚焦，这样才使得细胞能排列成单细胞的直线流，得以让细胞以单个细胞的形式通过激光检测区域。
图1：流体动力学聚焦单细胞流示意图
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原来鞘液有这些作用！那天加完鞘液，准备好仪器后，带师妹上样本做实验时，师妹看到散点图出现一个又一个的点，师妹问我这些点是什么，我跟她说很明显就是一个一个的细胞呀！师妹又继续追问我，那细胞进入流式细胞仪中，它的信号是如何被采集和转化的呢，然后我就解释不清楚了。
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师弟，你看看下面这张仪器采集细胞信号的图。当细胞通过激光束时，会产生散射光和荧光信号，这些信号最终是通过检测器的电流信号来展现的，而散射光和荧光信号强度，是与电流信号成正比的。当细胞刚进入激光束的时候，信号逐渐增强，当细胞处在激光束的中心时，信号达到峰值，之后随着细胞流出激光束，信号下降回到基线。
图2：单个细胞进入激光束时产生脉冲信号的过程
这样形成的脉冲峰，我们把它称之为一个事件（Event），就像下面这幅图展示的就是一个完整的脉冲峰。我们在画流式图的时候会使用到高度（Height），宽度（Width）和面积（Area）这些参数，其实都是来自于每个事件的脉冲峰。脉冲峰的高度对应的是检测器检测到的最大信号值，宽度对应的是事件进入和完全离开激光束的时间，而面积则是对脉冲信号宽度和高度的积分。
图3：通过测量脉冲的高度、面积和宽度来量化脉冲
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那我明白了，师妹当时还问我一般我们画图时，使用的都是面积信号，但为什么去除粘连时，就要用到高度或者宽度信号，我当时也是回答的支支吾吾的，其实应该就是因为这个脉冲信号的不同吧？
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是的！在画图时，对于散射光信号和荧光信号，通常我们会使用面积信号。因为面积信号是宽度和高度的积分，所以展示的信息会更丰富和全面。对于粘连体，也就是两个粘连在一起的细胞，在通过激光束的时候，它们的面积信号和宽度信号是单个细胞的两倍，高度信号和单个细胞一致。所以可以通过两者FSC-A，FSC-H以及FSC-W之间的差异来排除粘连体，例如可以通过FSC-A/FSC-H来排除。
图4：区分粘连体。A，粘连体（绿色门）宽度增加（因此面积增加），与单个细胞（红色门）高度相似。蓝色箭头代表激光束。B，通过绘制FSC 高度与FSC 面积的对比图，可以将粘连体（绿色框）与单个细胞（红色框）区分开。
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