是不是大量样品的WB跑胶、转膜让你抓狂？
每天忙着灌胶、跑电泳、转膜、孵育抗体、曝光拍照？
如果样品很多，特别是靶蛋白表达丰度还不错，你可以试试In-Cell Western方法！
先来看一下In-Cell Western与传统Western实验的时间与流程比较：传统WB通常需要 7-25 小时，最多一块胶跑 24 个样品，但 In-Cell Western 可以在 5-6 小时内完成最多 384 个样品。
In-Cell Western（ICW）与传统WB方法不同，其使用固定和透化的细胞而不是细胞裂解物对蛋白质表达进行原位分析。并且可以使用光谱不同的荧光染料对多个目标进行定量，是一种确定大量样品中相对蛋白质水平的快速方法。对于已经使用传统WB已经验证过抗体特异性且不需要考虑分子量的研究人员来说，ICW 是一种理想的实验方案选择。作为一种免疫荧光检测，ICW结合了传统WB的特异性与免疫荧光、ELISA 的更高重现性及通量，可对6 ~ 384 个孔的微孔板中生长的细胞中进行蛋白表达分析。
In-Cell Western的大致实验流程：
首先，对孔板中的细胞进行固定和透化处理，以允许抗体渗透进入细胞；
由于消除了传统WB方案中的样品制备、跑胶及转膜等步骤，ICW 需要的操作及实验时间更少。
通常的ICW的实验结果如下图：将 HEK293 细胞以 5k、10k、25k、50k、75k 和 100k 细胞/孔接种在重复的column中，靶蛋白为 Gamma（DyLight 680，红色）、p53（DyLight 800，绿色）和 看家蛋白 GAPDH（罗丹明，灰色）。
ICW 是一种多功能技术，可广泛应用于包括药物治疗或基因操作的蛋白质表达变化、评估蛋白-蛋白相互作用以及分析特定细胞区室中的蛋白质定位。ICW 还可用于筛选大型化合物库，了解化合物对蛋白质表达的影响，使其成为药物发现和开发的有效工具。
Bio-Rad ChemiDoc MP全能型成像系统及优化的 ICW 方案可以简化实验并优化效果。且红外及近红外（NIR）荧光染料标记的二抗通常用于 ICW 多重检测和内参，这些二抗可与 Bio-Rad 的 hFAB 罗丹明管家蛋白荧光一抗配合使用。ChemiDoc MP 系统具有五个荧光通道，可实现三重荧光的ICW实验，并提供卓越的图像质量，配套的ImageLab软件也可方便的进行ICW的结果分析。
ChemiDoc MP系统在
In-Cell Western实验中
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参
考
文
献
* BIO-RAD 是 BIO-RAD LABORATORIES, INC. 在特定区域的商标。
* 本产品仅用于科研用途，不用于临床诊断。