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WB超人系列|what?!这个锅“管家蛋白”可不背

WB超人系列|what?!这个锅“管家蛋白”可不背 广州市昊洋贸易有限公司
2023-11-13
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内参作为 Western Blot 实验中矫正上样量的管家蛋白,必须要表达稳定能够真实地反映出是非常重要的,但是我们现在却经常发现

1:内参蛋白的表达在受到各种因素处理下并非如想象般稳定

2:内参相较靶点,表达量往往要高得多。最后导致为了能够检测到低表达的蛋白,往往上样量会非常的大。就会导致在成像的时候内参信号过曝。所以由于信号远远超过了响应线性区间,此时的内参,已无法再科学、准确矫正上样量等误差了

3:内参信号过量,与上样量不是成“正比”关系,无法敏感且线性的反应泳道的真实上样量差异



所以无论从科学角度,还是从技术角度,依据传统内参对靶点表达进行校正,极易对实验结果产生误判。如果我们换用一种思路,使用总蛋白量作为“内参”,结果反而会更准确。

例如使用 Stain-Free 总蛋白为内参,我们可以得出非常明确的结论:FoxP1 表达量会上调,符合理论预期





TGX stain-Free 快速电泳凝胶:手灌/预制胶两种制式,15分钟电泳,3分钟转印,实时监控 wb 整个过程(免染可视化)。最高电压高达 300V,可兼容大分子和小分子蛋白。




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2:内参相较靶点,表达量往往要高得多。最后导致为了能够检测到低表达的蛋白,往往上样量会非常的大。就会导致在成像的时候内参信号过曝。所以由于信号远远超过了响应线性区间,此时的内参,已无法再科学、准确矫正上样量等误差了

3:内参信号过量,与上样量不是成“正比”关系,无法敏感且线性的反应泳道的真实上样量差异



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