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内参作为 Western Blot 实验中矫正上样量的管家蛋白,必须要表达稳定能够真实地反映出是非常重要的,但是我们现在却经常发现
1:内参蛋白的表达在受到各种因素处理下并非如想象般稳定
2:内参相较靶点,表达量往往要高得多。最后导致为了能够检测到低表达的蛋白,往往上样量会非常的大。就会导致在成像的时候内参信号过曝。所以由于信号远远超过了响应线性区间,此时的内参,已无法再科学、准确矫正上样量等误差了
3:内参信号过量,与上样量不是成“正比”关系,无法敏感且线性的反应泳道的真实上样量差异
所以无论从科学角度,还是从技术角度,依据传统内参对靶点表达进行校正,极易对实验结果产生误判。如果我们换用一种思路,使用总蛋白量作为“内参”,结果反而会更准确。
例如使用 Stain-Free 总蛋白为内参,我们可以得出非常明确的结论:FoxP1 表达量会上调,符合理论预期
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2:内参相较靶点,表达量往往要高得多。最后导致为了能够检测到低表达的蛋白,往往上样量会非常的大。就会导致在成像的时候内参信号过曝。所以由于信号远远超过了响应线性区间,此时的内参,已无法再科学、准确矫正上样量等误差了
3:内参信号过量,与上样量不是成“正比”关系,无法敏感且线性的反应泳道的真实上样量差异
所以无论从科学角度,还是从技术角度,依据传统内参对靶点表达进行校正,极易对实验结果产生误判。如果我们换用一种思路,使用总蛋白量作为“内参”,结果反而会更准确。
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