慢性乙型肝炎，这一隐匿的健康杀手，悄无声息地影响着全球约 3 亿人的生活，更是肝细胞癌和终末期肝病的主要诱因。在追求功能性治愈的道路上，乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的持续存在犹如一座难以逾越的高山，横亘在科研人员与患者的希望之间。核苷（酸）类似物（NUCs）治疗虽能有效抑制 HBV DNA 的产生，却在促使 HBsAg 消失方面收效甚微。而 HBsAg 的产生，源于 cccDNA 以及整合到宿主基因组中的 HBV DNA（iDNA）的转录，这一复杂的机制为后续研究埋下了伏笔。
探索：创新研究方法的奇妙之旅
为了揭开 HBsAg 持续存在的神秘面纱，科研团队踏上了充满挑战的探索之旅，运用了一系列创新的研究方法。单细胞激光捕获显微切割（scLCM），如同一位精密的 “细胞猎手”，能够从肝活检样本中精准分离单个肝细胞；多重微滴数字 PCR（ddPCR）超高灵敏度从单细胞样本中检测细胞中 HBsAg mRNA 的主要来源；免疫组化（IHC）如同一台 “抗原探测器”，能检测肝组织中的 HBsAg 和 HBcAg；血清学评估则是监测血浆中 HBsAg 和 HBeAg 水平的 “晴雨表”。
实验：精心设计的科学征程
10 名 HIV 和 CHB 共感染的男性患者成为了这项研究的关键对象，他们被分为早期治疗组和长期治疗组。每名患者在不同时间点接受两次肝活检，间隔中位数为 3.7 年。科研人员通过 scLCM 和 ddPCR 分析单个肝细胞中的 HBV 转录本犹如大海捞针，以此确定 cccDNA 和 iDNA 的转录活性。
结论：改写认知的重大发现
cccDNA 转录活性的衰减：在 NUCs 治疗过程中，cccDNA 的转录活性逐渐降低，转录 cccDNA 的细胞数量以及每个细胞的 cccDNA 转录本数量都在减少，这是治疗过程中的一个重要变化。
iDNA 转录活性的坚守：尽管 cccDNA 转录活性下降，但 iDNA 转录活性却在治疗期间保持稳定，这或许正是 HBsAg 持续存在的关键因素。
转录来源的悄然转变：随着 NUCs 治疗时间的延长，HBsAg 的转录来源从 cccDNA 逐渐转向 iDNA，早期治疗组的这一转变尤为显著。
血清 HBsAg 水平的差异：以 cccDNA 转录为主的患者，NUCs 治疗后血清 HBsAg 水平显著下降；而以 iDNA 转录为主的患者，血清 HBsAg 水平变化不明显。
病毒抗原表达的关联：cccDNA 转录与肝内病毒抗原（如 HBcAg）的表达密切相关，而 iDNA 转录则与之无明显关联。
技术力量：ddPCR 的关键作用
在这项研究中，ddPCR 技术扮演了至关重要的角色。它不仅能够区分 cccDNA 和 iDNA 转录的 HBsAg mRNA，通过检测特定的 HBV 转录本区域确定每个细胞的转录来源，还能提供高灵敏度和高特异性的定量方法，准确测量单个细胞中的 HBV 转录本数量。通过比较不同时间点的 ddPCR 结果，研究者得以评估 NUCs 治疗对 cccDNA 和 iDNA 转录活性的影响，以及这些变化对 HBsAg 水平的作用。
来自肝脏组织的含人类 - 病毒嵌合断点的转录图谱。彩色方框表示两个数字滴度聚合酶链反应（ddPCR）目标扩增子：乙肝病毒（HBV）中部片段和乙肝病毒 3' 端片段。
意义：照亮未来治疗的曙光
这项研究揭示了 iDNA 在维持 HBsAg 水平中的关键作用，为深入理解 HBsAg 在 NUCs 治疗期间持续存在的机制提供了全新视角。这对于开发新的治疗策略，实现 CHB 的功能性治愈意义重大。研究还指出，未来的临床试验应考虑肝活检，以便更好地理解治疗对 HBV 感染肝细胞的影响。
参
考
文
献
* BIO-RAD 是 BIO-RAD LABORATORIES, INC. 在特定区域的商标。
* 本产品仅用于科研用途，不用于临床诊断。