前期对于肝细胞癌（HCC）的研究表明，患者肠道菌群可调节肝癌细胞的免疫反应。本研究期望对非酒精性脂肪肝相关肝硬化（NAFLD）、非酒精性脂肪肝相关肝癌（NAFLD-HCC）及对照组的肠道菌群进行进一步分析比较，并在离体条件探究他们对T细胞免疫的影响。
本研究共招募90名受试者，其中 NAFLD 肝硬化患者28例，NAFLD-HCC 肝癌患者32例，非 NAFLD 对照患者30例，研究队列信息如下：
本研究的技术路线包括：
1.使用流式细胞术对外周血中的基线免疫细胞进行定量；
2. 使用宏基因组测序对患者粪便样本中的肠道微生物进行种群鉴定；
3. 运用质谱对肠道菌群的代谢产物进行比较分析；
4. 运用Bio-Plex及流式分析等方法在体外验证免疫反应；
值得一提的是，本研究选用 Bio-Plex Pro Human Cytokine Screening Panel 48-Plex (Bio-Rad, #12007283) 对 PBMC 培养液进行了测定，以验证体外条件的免疫反应。
检测结果表明，IL-2 和 IL-12（p70）在 CD8+ T 细胞的扩增和激活中很重要。与 NAFLD-HCC 相比，NAFLD-HCC 受试者的单菌提取物 BE 抑制了这些促炎性细胞因子的产生。此外，与非 NAFLD 对照 BE 相比，NAFLD-HCC 和 NAFLD 肝硬化 BE 均会抑制 IL-4 的产生。与 NAFLD- 肝硬化和非 NAFLD 对照 BE 相比，NAFLD-HCCBE 诱导了 IL-6 和抗炎细胞因子 IL-10 的相应增加。综上所述，NAFLD-HCC 微生物群引发了支持免疫抑制的细胞因子环境。相关数据如下：
其他实验的结果包括：
1. NAFLD 肝硬化和非 NAFLD 对照之间的 Tregs 或 CD8+ T 细胞百分比没有差异
2. 宏基因组测序证实了肝病中的营养不良，并在 NAFLD-HCC 中鉴定出一个产生免疫调节能力的肠道微生物菌属（数据如下图）
3. 代谢组学研究表明，NAFLD-HCC 受试者的粪便和血清中免疫调节的短链脂肪酸及其中间体的浓度升高
4. NAFLD-HCC 菌群诱导 IL-10+ Treg 效应物的扩增，同时减弱细胞毒性 CD8+ T 细胞的扩增
5. 关于短链脂肪酸及中间体，丁酸和 Tregs 和效应物 IL-10+ Tregs（R= 0.69，P= 0.031）之间发现正相关，此外，在丁酸盐和细胞毒性 CD8+ T 细胞之间发现负相关，再次凸显了这种短链脂肪酸 SCFA 在调节外周免疫应答中的重要性。
综上实验数据结果得出结论：（NAFLD）相关肝硬化患者的微生物出现失调特征，随着肝癌（HCC）的发展，其组成和功能发生改变；NAFLD-HCC 产短链脂肪酸的细菌种类的丰度增加，同时参与从膳食纤维中合成SCFA的功能基因增加；NAFLD-HCC 的粪便和血清中 SCFA 及其中间体浓度升高；来自 NAFLD-HCC 的微生物群细菌提取物在体外可诱导免疫抑制表型，包括调节性 T 细胞的扩增和 CD8+ T 细胞的衰减，减少抗原递呈细胞，同时诱导的细胞因子也支持免疫抑制表型。
案例总结
Bio-Plex Pro Human Cytokine Screening Panel 48-Plex 可以利用较少的样本在短时间内得到大量细胞因子水平检测数据，是基础医学免疫学验证的最强大工具之一，其技术优势包括但不限于：
- 更全面的检测范围：覆盖最常检测的48个细胞因子
- 更宽动态范围：健康/对照组和疾病/实验组同时定量，无需不同稀释比
– 更优性能：最新优化的试剂带来更高灵敏度
– 快速的检测方案：节省时间和精力，缩短实验和操作时间
– 简化的数据分析：Bio-Plex Manager和Data Pro有效地分析和管理您的 数据
– 灵活的仪器兼容性：兼容所有 Luminex 平台（LX200，3D和 MAGPIX）
-END-
* BIO-RAD是BIO-RAD LABORATORIES, INC. 在特定区域的商标。
* 本产品仅用于科研用途，不用于临床诊断。