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一、为什么一定要选择合适的内参基因
关于内参基因的选择很多初级的实验人员很少会去思考这个问题，因为摆在面前的基本上只有两种选择，β-actin 和 GAPDH，甚至在很多人长期的观念中对于内参基因的认知也仅仅停留在是一个表达量相对较高、较稳定的看家基因，是计算靶标基因相对表达量的一个重要参照而已，至于为什么要选这两种，还有没有其他合适的内参，大家的回答往往是 “我的师兄师姐就是这样用的，别的文献是这样写的，有问题吗？”或者这个问题直接把 ta 问懵了。
有问题吗？
有问题
小编：
要在这里大声的疾呼：“有，而且是很大的问题。”
当人们检测某个基因的表达降低或者升高得出结果以后，你并不知道是它本身的表达量发生变化，还是因为样本量大小，实验操作导致 RNA 的损耗，PCR assay 等其他原因导致的表达量变化，所以这时需要同时检测另外的基因作为参照，这些基因就被称为内参基因。
我们在前面的文章中反复提到内参基因，那么从科学严谨的角度来看，理想的内参有以下几个条件：
1、表达量较大；
2、稳定表达于不同类型的细胞和组织；
3、表达水平与细胞周期以及细胞是否活化无关；
4、不受任何内源性或外源性因素的影响；
5、不存在假基因，以避免基因组 DNA 的污染扩增。
以上是理想中的内参基因，让我们来一个一个看看常见的经典内参是不是真的称得上理想。
现在，问题就非常明确了，过去我们曾非常依赖的几大“著名”内参基因或多或少甚至在特定条件下存在着致命的缺陷，比如说肿瘤分子生物学的研究，似乎无法使用任何一种常规内参了，这该如何去解决呢？下面小编在这里将例举21种常用内参，并结合一些研究报道选择其中一些进行分析。
有研究学者对67例肝组织研究, 发现 UBC（泛素）和 HMBS（胆色素原脱氨酶）对于肝组织的表达分析是佳选择。在白血病、正常、恶性肿瘤中比较 β-actin、β2-MG 和 PBGD （胆色素原脱氨酶），发现 β2-MG 合适作为内参。PRKG1 和 TBP 是适合于在B和T细胞及其肿瘤中控制 RNA 的质量和产量。
综上所述
当我们进一步对不同种类的内参基因进行内参筛选和研究的时候就会发现，内参世界比我们想象的要更为复杂，当我们所研究的对象从原核到真核，从细胞到组织，从正常到恶化病变，所有改变的条件对于内参的选择就是一次筛选，现实并不存在一种适合所有条件和样本类型的万能内参，正如我们前面的文章中介绍的那样，选择至少≥3个内参取几何平均值再做归一化，从理论上讲更科学、更能减小误差。
所以，不同的内参基因在不同的实验条件都有成为合适内参的潜能。在一组给定的标本或实验条件中, 平行测定多个内参的表达量有助于发现和减小系统误差。
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在此希望能够有更多的科研人能够在实验前就已经认识到内参基因的重要性，并提前规避可能因为内参选择不当而导致后期实验数据没有意义的情况发生。
未完待续
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下期预告：
《如何为 RT-PCR 实验选择合适的内参基因（中）》，小编手把手教大家选择适合自己实验的内参基因，敬请期待~
参
考
资
料
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* 本产品仅用于科研用途，不用于临床诊断。