随着技术的进步，流式细胞仪的功能越来越强大，从而可以进行更广泛和复杂的多色免疫表型分析。但这也造成了实验设计的难点，Bio-Rad开发的 StarBright 染料可以帮助研究者规避许多此类问题，从而获得一致且可靠的结果。
免疫表型分析是基础研究和临床诊断实验室中研究免疫细胞的常用技术。通常利用流式细胞术，使用荧光标记抗体根据特定标记的存在或不存在来识别细胞类型。基于流式细胞术的免疫表型分析的许多重要应用包括疾病诊断、疾病阶段的表征以及转化研究中候选治疗功效的分析。
多色流式细胞术是从血液或组织样本中描绘混合细胞群的有效工具，因为它可以同时分析许多荧光标记。然而，检测和区分更多荧光染料的流式细胞仪的出现既是福也是祸，因为它给配色方案的创建和分析带来了许多新的挑战。
规划荧光基团的亮度：
设计多色配色方案时要考虑的一个主要方面是为标记物选择合适的荧光基团。考虑目标蛋白的抗原密度是很有价值的，这样您就可以将难以检测的标记物与高亮度的荧光基团配对，最大限度地提高稀有群体的分辨率。同样，暗荧光基团应用于高表达的标记。荧光基团的亮度/暗度可以使用荧光基团的染色指数来确定，该指数测量阳性和阴性群体之间的分离。
荧光基团之间的光谱重叠：
选择合适的荧光基团时要考虑的另一点是配色方案中使用染料的光谱重叠。具有较宽的发射光谱，导致溢出到其他检测通道中，从而降低信号分辨率。这可以通过称为“补偿”的数学过程在一定程度上进行校正，并且在选择染料时应考虑所需的最小补偿量。理想情况下，最好使用那些具有窄激发和发射光谱的染料，从而尽量减少串扰和补偿。
避免不可靠的荧光染料：
串联染料经常用于构建大的流式Panel，其含有两个共价偶联的荧光分子。然而，应谨慎使用串联染料，因为它们会降解和/或解偶联，导致不必要的光谱信号。例如，在同时使用 APC 和 APC-Cy7（串联染料）的Panel中，后者的降解将导致其信号被检测为前者和 Cy7 信号。这会显着影响数据的解读，因此最好尽可能避免使用串联染料。
实验条件对荧光基团的影响：
还要考虑荧光基团是否需要使用特定的缓冲液。例如，当使用聚合物染料（例如BV和BUV）时，需要使用特殊缓冲来抑制聚合物与聚合物之间的相互作用。这些染料的聚集会扭曲预期的荧光信号，并在数据分析过程中造成混乱。您不仅必须注意哪些染料需要特殊缓冲液，而且必须确认Panel中的其他染料也与该缓冲液兼容。由于将使用多种不同类型的荧光基团，因此在构建大型多色免疫表型分析Panel时，这一点变得尤其重要。
StarBright 染料：轻松解决以上问题：
虽然构建免疫表型分析的复杂多色Panel具有挑战性，但从此类实验中获得的数据是广泛且不可或缺的。幸运的是，专为多参数流式细胞术设计的 StarBright 染料解决了与该技术相关的许多常见痛点。
明亮：
StarBright 染料非常明亮，适用于低抗原密度标记物和稀有群体其亮度等同或超过类似染料的亮度。
StarBright 染料（红色）与类似染料（蓝色）相比的比较，CD4 染色
窄光谱：
StarBright 染料具有较窄的激发和发射光谱，可减少不必要的激发，并最大限度地减少溢出到其他检测通道。不但简化了补偿，并使数据分析更加简单。
与 PerCP-Cy5.5（红圈）相比，StarBright Blue 700 染料 (SBB700) 的激发光谱更窄
缓冲液兼容性：
StarBright 染料的另一个主要特点是其缓冲液兼容性。它们不仅不需要特殊缓冲液，而且也不受Panel中其他染料所需的特殊缓冲液影响，从而产生明亮且可靠的染色。
不同缓冲液中，StarBright Violet 670 染料 (SBV670) 的 CD4 染色均无变化
稳定的亮度：
StarBright 染料不是传统的串联染料，因此不太会被激光交叉激发，并在长时间内保持一致的染色和信号。即使使用多聚甲醛 (PFA) 或酒精固定剂也不会改变其信号的亮度。
StarBright 染料 (CD14SBV610) 在室温、黑暗或光照下条件；不同固定缓冲液或磷酸盐缓冲液中的稳定性
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