作为生物学基础实验之一的Western Blot技术几乎是所有相关领域研究者每天必做的实验。但是，我们WB蛋白表达结果真的可靠吗？也许很多人都曾经怀疑过自己的Western定量结果，更加悲催的是在不断的重复实验中浪费青春，同时浪费着老板的课题经费！
有些Western实验中，内参的选择会带来不同的定量结论（特别是实验重复量不够的情况下，文献1）。dsi敲低E3连接酶表达后，FoxP1蛋白表达量会发生什么变化？
以actin为内参进行归一化定量，FoxP1没有明显表达差异；以β-tubulin为内参归一化后，FoxP1有上调（p=0.005）；而以Stain-Free总蛋白为内参，我们可以得出非常明确的结论：FoxP1表达量会上调，符合理论预期！因为，在通常情况下E3连接酶会对FoxP1产生降解作用，所以在敲低E3连接酶后，FoxP1的表达上调是符合预期的。
actin内参没有得到统计学意义的结论；
β-tubulin内参虽有统计学上的差异，但是结果的CV略高；
Stain-Free内参不但显示了非常强的统计学差异，并且其CV值很低，与理论预期完全一致。
实在是太开脑洞了，原来困扰很多人的WB定量不准的问题出在内参的选择上！神奇的Stain-Free技术可以实现比普通管家蛋白更精准的WB定量！
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参考文献：Stain-Free total-protein normalization enhances the reproducibility of Western blot data, Analytical Biochemistry (2022)
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