慢病毒载体因其能够感染分裂和非分裂细胞，以及稳定整合到宿主细胞基因组中，已成为基因治疗研究中的关键工具。然而，准确测定这些载体的感染滴度对于确保治疗的安全性和有效性至关重要。传统的检测方法，如FACS和实时定量PCR（qPCR），存在局限性，包括耗时长、需要特定抗体、以及无法区分单个和多个载体感染的细胞。
在中检院的最新研究中，研究者们开发了一种基于ddPCR技术的新方法，用于准确、快速地量化慢病毒载体的感染滴度。这项发表在《Heliyon》杂志上的研究，不仅提高了慢病毒感染滴度检测效率，还为CAR-T细胞疗法和其他基因修饰细胞治疗产品的开发提供了一种新的质量控制工具。
在研究中，基于ddPCR的检测方法能够绝对定量目标基因，并且显著缩短了实验周期。通过使用Benzonase酶处理非转导质粒，研究团队将细胞培养时间从10-14天缩短至3天，极大提高了检测效率。
研究团队对ddPCR方法进行了严格的验证，包括特异性、工作范围、定量限、精度、准确性和稳定性评估。结果显示，ddPCR方法在特异性方面表现出色：
该方法能够有效排除非目标物质的干扰，确保检测结果的准确性。
检测范围大约为3100至1.55E6转导单位每毫升（TU/ml），适用于低滴度样本的检测。
内批次和间批次的变异系数（CV）均≤25%，表明方法具有良好的重复性。
通过与已知基因拷贝数的细胞比较，ddPCR方法的准确度超过90%。
在不同实验条件和设备下，该方法均显示出良好的性能。
此外，研究团队还比较了ddPCR方法和FACS方法测定的慢病毒感染滴度。结果显示，基于ddPCR评估的感染滴度比FACS方法高出约4-5倍。这一差异可能与FACS方法的局限性有关，例如无法区分单个载体和多个载体感染的细胞，以及无法检测到整合但非功能性的病毒载体拷贝。
参
考
文
献
* BIO-RAD 是 BIO-RAD LABORATORIES, INC. 在特定区域的商标。
* 本产品仅用于科研用途，不用于临床诊断。