客户:华南理工大学 Bio-Rad Biologic LP低压层析客户。
背景:客户使用某知名品牌层析柱纯化蛋白,出现了难题,目的蛋白挂柱70%左右,最后要用8MUrea变性才可以冲洗干净,使得目的蛋白得率低,实验步骤繁杂,也会导致柱子使用寿命缩短等问题。我们对LP进行回访与客户沟通发现此情况,推荐试用NuviaIMAC-Ni。
试用实验过程:
图1 NuviaIMAC-Ni洗脱图谱

图2 客户此前使用的Ni柱洗脱图谱
洗脱峰分别为使用50mM 咪唑+35mM NaCl、100 mM 咪唑+70mM NaCl、200 mM 咪唑+140mM NaCl、300 mM 咪唑+210mM NaCl、400 mM 咪唑+280mM NaCl、500 mM 咪唑+350mM NaCl的 Buffer B所得。
洗脱结束后,使用2M Urea和0.5M NaOH清洗层析柱。

图3 实验结束后清洗之前的柱子对比
从柱子外观初步判断,Nuvia IMAC-Ni柱明显比对方层析柱的残留少
电泳检测纯化效果和残留问题。

图4 Nuvia IMAC-Ni纯化的电泳结果

图5 客户此前使用的Ni柱纯化的电泳结果
红框指示目的蛋白位置,二者对比,Nuvia IMAC-Ni柱比客户原有的层析柱得率高,残留挂柱少。
Bio-Rad Nuvia IMAC采用的是NTA方式。一般说来,NTA方式具有更高的结合载量、更广的应用范围。
Bio-Rad公司采用的层析基质,是具有专利技术的聚丙烯酰胺基质微球—UNOsphere。这些基质/微球具备出色刚性的传质性能与弹性化学结构。总之,您可以实现比其他产品更快的运行流速。
Nuvia IMAC Ni-离子金属亲和层析具有比竞争对手更好的性能:
·得益于UNOsphere 介质出色的传质特性,Nuvia IMAC 预装柱与介质能够在较高的流速下运行
·结合载量超过40 mg/ml
·再生损失极低,在反复的镍离子“剥离/再螯合/纯化”过程中,结合率的损失不到5%。
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