通常而言，神经组织样品的Western Blotting实验比较难以获得理想的效果。特别是和普通的以培养细胞为材料的Western Blotting实验相比，无论是目的蛋白的条带还是内参条带，往往图像结果不太理想 — 条带过弱、条带变形等问题经常出现。特别是，当需要比较准确的蛋白表达定量分析时，难以获得与预期相符的结果，或者定量结果与其他实验结论相冲突。
神经组织样品中脂肪含量较高，较高的脂肪含量对样品中蛋白的提取、处理、定量和电泳都有一定的影响。例如，人脑中的脂肪含量通常会达到干重的50%以上。脂肪会大量消耗缓冲体系中的表面活性剂，从而影响蛋白质的表面活性剂加成。在跑电泳过程中，样品中未出去的脂肪也会影响蛋白条带的电泳行为，造成条带的弥散或变形。这种情况下如对目的蛋白的表达进行准确定量，就会更有难度。
另外，不可忽视的是多种病理、非病理情况都会影响传统内参蛋白（actin、tubulin、GAPDH）表达量的恒定（参考文献1）。例如在脊髓损伤和阿尔茨海默氏病等各种神经病理事件中，一些看家基因在 mRNA 和蛋白质水平上存在显着变化。各种组织中的非神经元疾病，如肾肿瘤、糖尿病、肝脂肪变性等也会引起管家基因的变化。这些发现引起了人们对使用管家蛋白作为内参是否合适的潜在担忧。
（图源：参考文献1）
为获得更准确的神经组织样品Western Blotting定量结果，越来越多的研究者使用总蛋白代替看家蛋白的方式做内参，从而获得更准确的定量结果。
法国国家科学研究中心斯特拉斯堡医学研究所的研究团队在《Neurobiology of Disease》上发表的研究中（参考文献2），使用了Stain-Free免染总蛋白作为内参，定量神经组织样品（小鼠脊髓、人脑）中的Apelin-13（爱帕琳肽13）表达水平。
Stain-Free免染总蛋白内参方法的Western结果。样品分别为多发性硬化症（Multiple Sclerosis, MS）高峰阶段、幼年小鼠的脊髓。
（图源：文献2）
Stain-Free免染总蛋白归一化后获得的Apelin-13定量结果显示。多发性硬化症高峰阶段Apelin-13的表达量显著下调。
（图源：文献2）
研究发现EAE 小鼠和 MS 患者的中枢神经系统中 Apelin 蛋白质水平均降低。而通过氟化阿普林肽补充 Apelin 13 能够穿过 BBB 并改善 EAE 评分。氟化阿普林肽可在体外保存神经元并介导小胶质细胞和巨噬细胞的功能。
Stain-Free免染技术可缩短传统WB实验时间，同时帮助识别电泳、转移和印迹中的潜在问题。该技术可与您现有的WB实验无缝集成，并通过总蛋白内参获得真正的定量数据。Stain-Free技术利用直接浇铸到凝胶中的荧光化合物，经过短暂的紫外线激活后，该化合物通过与色氨酸残基共价结合增强天然蛋白荧光。由于这种独特的特性，可以轻松多次捕获凝胶或膜上的总蛋白质图像，而无需任何染色或脱色。
将免染凝胶在成像仪中紫外激活，从而无需染色、脱色即可实现总蛋白的可视化。
免染技术有助于故障排除，更快地发现问题。您可在跑胶后立即看到总蛋白（左）。转印后，对膜（中间）和凝胶（右）进行成像，以确保蛋白质已完全从凝胶转移到膜上。
使用免染技术进行总蛋白检测可在广泛的上样范围内提供线性信号。A，免染总蛋白信号。B，β-actin信号。C，β-tubulin信号。D，GAPDH 信号。E，一系列蛋白浓度范围内比较总蛋白与看家蛋白的线性。
免染总蛋归一化比看家蛋白对信号饱和的抵抗力更强，允许通过将条带标准化为每条泳道中的总蛋白来获得真正定量的WB数据。总蛋白归一化也比传统的看家蛋白更能抵抗实验处理引起的表达变化，提供更高的准确性（参考文献3）。
如您想要了解更多关于Stain-Free技术，或需要产品试用演示请与我们联系。
参
考
文
献
* BIO-RAD 是 BIO-RAD LABORATORIES, INC. 在特定区域的商标。
* 本产品仅用于科研用途，不用于临床诊断。