大数跨境

做EV研究的筒子们看过来:Bio-Rad 细胞外囊泡层析纯化及表征流程

做EV研究的筒子们看过来:Bio-Rad 细胞外囊泡层析纯化及表征流程 广州市昊洋贸易有限公司
2024-03-27
0


不同细胞来源释放的细胞外囊泡(EV)是不同膜包裹的纳米尺寸颗粒的异质组装体。EV 含有特定的分子货物,在细胞间通讯中发挥动态作用,并且是诊断和治疗应用日益关注的主题。由于其异质性,EV 的分离和纯化具有挑战性,没有任何一种技术可以在许多不同的样品基质中达到令人满意的纯度。目前,已有离心、层析等有多种技术用于分离纯化EV。然而,研究者需要更多的标准化和自动化方法。


体积排阻色谱 (SEC) 作为 EV 分离方案中的一种有价值的方法已获得广泛认可,其具有温和、可重复的潜力,并且能够以合适且理想的纯度和完整性分离 EV,以满足后续应用。我们的应用团队开发了一个基于分子筛原理的层析分离、纯化、表征EV的工作流程。



本工作流程中,我们使用Bio-Gel A-1.5m Gel的分子筛层析柱作为分离介质,在NGC自动化层析系统上对含有EV的样品进行层析分离,分离出来的组份自动收集在收集器的试管中,各组份经纳米颗粒跟踪分析 (NTA)、Stain-Free 电泳及多重荧光WB技术进行表征表征。实验结果表明,该流程可有效、高产量的富集 EV。



工作流程构成



层析系统: 

NGC Quest 10 Plus 层析系统,同时使用220、260 和280 nm 三个检测通道。并配有BioFrac 或NGC 组份收集器(96孔盘)。使用 1x 磷酸盐缓冲液(PBS)作为流动相。


层析柱及填料: 


使用Bio-Gel A-1.5m 预装分子筛层析柱或其他等效的凝胶分子筛填料,柱体积为 1–20 ml 。


层析柱测试表征: 


使用Blue Dextran MW 2M DaBio-Rad Gel Filtration Standard标准蛋白混合样对柱效进行表征。


纳米粒子追踪分析:


使用 Particle Metrix 的 PMX 220 ZetaView TWIN 在 520 nm 处通过 NTA 测量分子筛层析前、后样品中颗粒的浓度和尺寸分布。系统配备405 和 520 nm两个激光器。

电泳和多重WB表征:


使用Criterion TGX Stain-Free 预制免染凝胶获得层析后的总蛋白凝胶电泳图像。EV markerWB检测使用多重荧光标记抗体同时检测,凝胶及WB图像使用ChemiDoc MP 成像系统获得。

结果:


CCM 样品在Bio-Gel A-1.5m色谱柱上的 EV 分离的色谱图。在 260 nm 和 280 nm 处记录洗脱曲线,收集器将 250 µl 馏分收集到 96 孔板中。


分子筛层析分离后的组份粒度分布(对数刻度),绿色为Bio-Gel A-1.5m色谱柱,紫色为其他层析柱。


分子筛层析前后及各组份的蛋白电泳结果。


多重荧光WB对EV marker的表征分析。


获取详细的Bio-Rad细胞外囊泡层析纯化及表征流程参数及结果,请扫描二维码,填写您的联系方式,索取技术资料;或联系我们的销售和技术支持,提供更详细的解决方案。


* BIO-RAD是BIO-RAD LABORATORIES, INC. 在特定区域的商标。

* 本产品仅用于科研用途,不用于临床诊断。


【声明】内容源于网络
0
0
广州市昊洋贸易有限公司
生物科学信息交流,品牌宣传,产品推广,资源共享
内容 0
粉丝 0
广州市昊洋贸易有限公司 生物科学信息交流,品牌宣传,产品推广,资源共享
总阅读0
粉丝0
内容0