在本系列前篇文章《首个兼容组织和血样的 ddPCR MSI 试剂盒正式发布！》中，我们介绍了 MSI 检测的背景和意义，接下来我们看一下 MSI 检测的方法有哪些，以及 ddPCR MSI 试剂盒的优势和获益。
MSI/MMR 检测方法
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微卫星不稳定的现象早在1993年被发现，经过30年的研究和推广，已经是比较成熟，被众多指南推荐的经典分子检测项目。
MSI 状态检测方法学比较[1]
IHC：
MSI 多由 MMR 蛋白表达缺失引起的 dMMR 导致，故可通过免疫组化（IHC）检测4种主要 MMR 蛋白来反映 MSI 状态。
缺点：由于 MMR 系统包含的作用蛋白众多，有可能漏掉一些非经典 MMR 蛋白引起的异常；同时由于肿瘤的异质性，IHC 检测 MSI 会有约10%的漏检[2]。
PCR:
目前公认的检测 MSI 的金标准是 PCR+ 毛细管电泳法 (CE)，此方法灵敏度高，特异性强。
缺点：要求使用正常癌旁组织作为对照，且只适用于肿瘤组织≥20%的组织样品。
NGS：
NGS 也是近年来检测 MSI 的常用方法，适用于组织和血样，但一般与其他位点组成大 panel，同时进行检测，以降低检测成本。
缺点：大 panel 对病人来说总的时间和金钱成本更高；对于指南没有推荐其他检测位点的癌种来说，大 panel 更是额外的负担。
基于 ddPCR 的 MSI 检测
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Bio-Rad 最新推出的 MSI 试剂盒使用Droplet Digital PCR（ddPCR）技术，可快速评估基于 Promega Panel 的5个 MSI 靶点，灵敏度高，重复性好，不需要对照组织，实现软件自动分析，是首个兼容组织和血液样本的快速 MSI 检测试剂盒。
规格：3个反应/样本，56 个样本/试剂盒
硬件：QX200 系统
软件：QX Manager PE 2.1 和 QX Designer 1.0
产品优势和获益：
兼容组织和血液样本，上样量少：
FFPE≥6ng，肿瘤组织含量≥10%；血浆≥2ml
少量穿刺样本即可进行检测，利于快速开展治疗
对于疾病晚期或自身状态差不能手术的病人，可使用血样替代，用于指导治疗
对于手术或辅助化疗后的病人，使用少量血样即可进行预后和复发监测
无需正常组织对照：
分析软件内置有来自大规模正常组织的基线
避免了由于癌旁组织不足导致的不能检测的问题（PCR/CE 要求每个待测肿瘤组织有相匹配的正常癌旁组织作为对照）
节约资源、成本和时间
自动分析和解读：
每个位点自动判读阴阳性，无需人工比对或计算
与 PCR/CE 相比，避免了人工比对或计算造成的错判
与 NGS 相比，不需要专门的生信团队进行结果分析，时间短，成本低
高灵敏度和特异性：
与 PCR/CE 方法对比，100%灵敏度和>96%特异性*（*2个血液样本 DNA 上样量少于 1ng，可能是导致不一致的原因）
*non-CRC 样本包含子宫内膜癌，十二指肠癌，肾上腺癌，胆囊癌，宫颈转移性癌，食管转移性癌，前列腺癌，肺癌，胰腺癌和胃癌。
经多中心临床实验对比，在多种肿瘤组织和血样（配对组织）上的结果与 PCR/CE 的一致性非常高
血样和配对组织的 MSI 检测一致性高，说明在组织缺失时，使用血样替代是可行的
6h 出报告：
约 5.5h 出结果，其中手动操作约 0.5h。
一个工作日即可出结果，利于患者快速开展后续治疗
手动操作时间短，节省人力
订购信息：
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货号# |
描述 |
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12015172 |
ddPCR Microsatellite Instability (MSI) Kit |
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12018108 |
QX Manager PE v2.1 |
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1. 结直肠癌及其他相关实体瘤微卫星不稳定性检测中国专家共识. 实用肿瘤杂志2019年, 第34卷, 第5期
2. Wu Y et al. Association of hereditary nonpolyposis colorectal cancer-related tumors displaying low microsatellite instability with MSH6 germline mutations. Am J Hum Genet 1999;65(5):1291–
* BIO-RAD是BIO-RAD LABORATORIES, INC. 在特定区域的商标。
* 本产品仅用于科研用途，不用于临床诊断。