《Circulation》文章都在使用的WB双内参，了解一下？

揭示异常蛋白质聚集与心脏病之间的关系

异常蛋白质聚集（Aberrant Protein Aggregation，APA）是多种人类疾病中的一个普遍现象，包括神经退行性疾病、糖尿病和心脏疾病。APA与蛋白质质量控制的不足有关，形成恶性循环。心脏疾病中，JAK-STAT信号通路的激活与心脏肥大和缺血/再灌注损伤等心脏病理过程有关。

2024年10月发表于心脏病权威期刊《Circulation》，题为“Sustained but Decoyed Activation of the JAK1-STAT Pathway by Aberrant Protein Aggregation Exacerbates Proteotoxicity”的研究论文提供了APA在心脏疾病中的作用机制的新见解，并提出了可能的治疗靶点。该研究首次表明APA将心肌中的Ser727-磷酸化STAT1（p-STAT1）劫持到异常蛋白质聚集体中，导致JAK-STAT通路的持续但欺骗性的激活，进而加剧APA和蛋白质毒性。抑制JAK1激酶活性可以打破这一恶性循环，为治疗APA依赖性疾病提供了一种新的策略。

研究发现：异常蛋白质聚集导致JAK-STAT通路的持续但截短的激活，这种激活未能激活负反馈基因（SOCS1/2/3），导致JAK-STAT通路的初始步骤持续激活。p-STATs被纳入聚集体中，进一步加剧了APA，形成恶性循环。

• 在CRYABR120G（R120G）转基因小鼠中，与非转基因同胞相比，心肌中的Ser727-磷酸化STAT1（p-STAT1）、STAT1、p-STAT1/STAT1比率、STAT3和STAT6蛋白水平显著增加，而这些小鼠在1个月和3个月大时心脏APA普遍存在，但尚未出现明显的心力衰竭。

• R120G转基因小鼠中，JAK-STAT通路的负反馈调节基因（SOCS1/2/3）的蛋白和mRNA水平并未增加。

• 全基因组RNA测序数据显示，JAK-STAT通路基因在差异表达基因中并不富集。

• 在心脏过度表达7个氨基酸（R173-E179）缺失突变体desmin（D7-Des）的小鼠中也观察到了类似的p-STAT1和STAT1的增加。

代表性Western Blot数据，说明可溶性及非可溶性STAT1的表达。Stain-Free免染总蛋白作为上样控制（L.C.，Loading Control）。完整图片及相关数据请查阅文献：doi.org/10.1161/CIRCULATIONAHA.124.0700

论文中的Western Blot实验使用了两种内参：GAPDH及Stain-Free总蛋白，以在不同条件下获得Western Blot的定量数据。使用GAPDH作为内参是Western Blot的常规操作，但在某些样品中或实验处理条件下，传统内参（例如GAPDH）的表达会出现不稳定的情况，那么总蛋白内参就是一种更优选择。在本研究中，作者使用了Stain-Free免染技术获得的内参作为GAPDH的替代，从而确保Western Blot实验的准确性。随着对管家蛋白稳定性的质疑日益增加，Stain-Free技术提供了一种更可靠的替代方案。

Stain-Free技术通过UV检测预染色的凝胶，实现了对总蛋白量的直接和定量评估。这种方法不仅适用于传统的Western Blot分析，还能够在多种实验条件下提供准确的蛋白加载控制。随着Stain-Free技术的推广，它有望成为新的标准操作程序，为生命科学及医学研究提供更可靠的数据支持。

* BIO-RAD是BIO-RAD LABORATORIES, INC. 在特定区域的商标。

* 本产品仅用于科研用途，不用于临床诊断。