对比研究γ-聚谷氨酸(纯品)和发酵液作为微生物肥料,对作物生长和养分利用的影响,为化肥减施和可持续农业的发展提供依据。何宇,吕卫光,李双喜,郑宪清,张翰林,张娟琴等学者以小白菜作为研究对象,利用筛选的γ-聚谷氨酸高产菌A-5及其发酵产物,开展盆栽试验。测定了γ-聚谷氨酸和γ-聚谷氨酸发酵液对小白菜品质、土壤理化性质和土壤酶活性的影响,并计算肥料表观利用效率和经济效益。结果显示,枯草芽孢杆菌A-5所生产的γ-聚谷氨酸和γ-聚谷氨酸发酵液均具有较好的促生增效效果;与减少30%氮肥处理相比,γ-聚谷氨酸和γ-聚谷氨酸发酵液处理分别使小白菜产量增加20.19%和37.63%,后者促生效果更佳。在含有大量活性生产菌株的γ-聚谷氨酸发酵液处理下,N/P当季肥料利用率显著高于其他处理,较γ-聚谷氨酸具有更高的经济效益。综上所述,枯草芽孢杆菌A-5所产γ-聚谷氨酸发酵液对促进小白菜生长和提高肥料利用效率有显著效果,具有较好的应用前景,可为其在农业中的应用提供理论依据。

γ-聚谷氨酸的功能
γ-聚谷氨酸(γ-PGA)作为一种环境友好型高分子聚合物,具有多种优良性能,在医药、环境、农业等领域中具有广阔的应用前景。
1. γ-PGA具有良好的生物降解性,在医药方面被用作制备药物载体,解决了天然药物难溶、不稳定所造成的药物利用率低这一难题。
2. γ-PGA具有良好的吸水性和黏结性,可利用生产菌株发酵制备γ-PGA,将其作为污水处理中的絮凝剂使用,絮凝活性较佳。
3. γ-PGA本身含有大量游离的亲水性负电α-羧基和氢键,因此有极强的吸附特性,负电羧基与土壤养分离子进行吸附交换的能力远高于土壤本身,且能有效阻止肥料养分与土壤微量元素结合,大大减少养分淋失,提高肥料利用率,因此常用作农业生产中的肥料增效剂和缓释剂。
将枯草芽孢杆菌发酵产物直接作为菌肥施用,试验结果表明,添加菌肥与不添加菌肥相比,植株生长明显,产量高30.4%,株高和茎粗也明显优于后者,既促进了植物生长又达到了肥料减量的效果。

试验设计
采用盆栽试验,盆钵规格67.5 cm×17.0 cm×15.0 cm, 每盆装土10 kg。试验共设置5个处理:(1)不施肥—CK;(2)常规施肥—CF;(3)减30%氮肥—-N;(4)减30%氮肥+γ-PGA纯品—-N+PGA;(5)减30%氮肥+产γ-PGA发酵液—-N+FJY。其中,γ-PGA施用量为60 mg·kg-1,发酵液为A-5菌株在发酵培养基中37 °C培养2天而得,根据γ-PGA浓度和所需纯品量折算施用量。试验采用随机区组排列,每个处理设置4个重复。待植株长出3个叶片后进行间苗,每盆保苗7棵。各处理具体施肥量见表1。γ-PGA纯品氮磷钾含量:N 0.15%, P2O5 0.11%,K2O 0.41%;发酵液氮磷钾含量:N 0.3%, P2O5 0.16%,K2O 0.11%,γ-PGA纯品和发酵液中氮磷钾不会对整个实验存在干扰。

不同处理对小白菜产量和品质的影响
各处理不同程度地影响了小白菜产量和品质(表2),研究表明,将γ-PGA作为微生物肥料施用,可明显提高作物的叶面积和产量,减少化学肥料使用量。本实验使用的枯草芽孢杆菌A-5具有较高的γ-PGA生产能力,施用通过它发酵制得的γ-PGA纯品和γ-PGA发酵液,小白菜产量和养分均大幅度提升,但发酵液的效果要高于γ-PGA纯品,因此,我们初步推测,施加γ-PGA发酵液的促生效果要优于γ-PGA,而γ-PGA纯品需要发酵液经过纯化、干燥等处理才能制得,因此使用发酵液也可以在一定程度上降低成本。出现这样的结果,可能是因为发酵液中不仅含有可促生的γ-PGA成分,同时存在大量活性菌株B.枯草杆菌属A-5,其可在土壤中稳定存在,并进一步活化土壤养分,增强植株光合作用,从而增加作物产量。

发酵液处理后的小白菜硝态氮含量远低于我国规定最低限值(<432 mg·kg-1),符合安全标准;而常规施肥(CF)处理中小白菜硝态氮含量为439.03 mg·kg-1,超过了最低限值,需要引起重视。本实验还发现,施氮量和硝态氮含量存在一定正相关性,说明供氮水平可影响蔬菜的硝酸盐累积量,另外,微生物菌剂中存在的大量活性菌株也有一定降低硝酸盐含量的作用。因此,在生产中控制施氮量,可有效降低硝酸盐的积累,配合微生物菌剂的使用,以保证蔬菜品质和产量。
不同处理对土壤理化性质及酶活性的影响
土壤氮、磷含量是指征土壤肥力,评价施肥合理性的根据。如图1所示,CF、-N、-N+PGA和-N+FJY处理对土壤全氮(S-TN)、土壤全磷(S-TP)和土壤速效磷(S-AP)含量均有不同程度的影响。相对于CK和-N处理,CF(常规施肥)、-N+PGA(减30%氮肥+产γ-PGA发酵液)和-N+FJY(减30%氮肥+产γ-PGA发酵液)处理下S-TN(土壤全氮)含量显著提高,S-TP含量最高的是-N+PGA处理(1.75 g·kg-1),相较含量最低的CK增加了48.31%。


由表3可知,-N+PGA和-N+FJY处理下土壤pH值最低,显著低于CF处理(P<0.05),CK、-N与CF处理相比pH值未见明显变化。土壤有机质(SOM)与土壤肥力密切相关,通常呈正相关性;-N和-N+PGA处理显著提高了收获季土壤有机质(SOM)含量,而CF处理低于CK处理,证明了大量单施化肥会导致有机质降低这一结论(表2)。
土壤酶活性是衡量土壤肥力的重要指标之一,土壤蔗糖酶和脲酶的活性会随微生物菌剂的添加而提升。实验结果表明,在γ-PGA生产菌株存在条件下,γ-PGA对土壤脲酶活性的影响作用更突出。而脲酶对尿素转化过程起到关键性作用,反映土壤供氮能力;结合发酵液处理后小白菜和土壤中的全氮含量结果,推断微生物利用自身生命活动提高土壤根系生物量和酶活性,而γ-PGA的存在为土壤养分和植株建立桥梁,增强了植物对养分的吸收能力,从而提高了植物生物量和肥料利用率。这也进一步说明,土壤酶活性对蔬菜生长中土壤养分的供给有较大的影响作用。过氧化氢酶作为指征土壤分解过氧化氢能力的酶,施用γ-PGA或菌剂后过氧化氢酶活性也会随之提高。
肥料利用率和生产效益
根据计算肥料偏生产力、农学效率和当季利用率的结果如表4所示。肥料偏生产力表示投入单位肥料所收获的作物产量,是肥料施用量和产量的直接比值,受肥料施用量的影响。本实验中,-N处理的PFPN显著高于CF处理,符合随着氮肥用量的降低,PFPN呈逐渐增加的趋势,而在-N处理的前提下,-N+PGA和-N+FJY处理提高了土壤养分含量,又进一步提高了PFPN(偏生产力),结果为-N+FJY>-N+PGA>-N;减少总施氮量是常见的减肥措施,本试验中各处理下磷肥施用量一致,但PFPP呈现-N+FJY>-N+PGA>CF>-N的趋势,其中-N+FJY较-N处理高出37.63%(P<0.05)。农学效率指示单位肥料施加量所产生的产量增加值,呈现的趋势与偏生产力较一致。肥料当季利用率方面,-N+FJY(减30%氮肥+产γ-PGA发酵液)处理的NUE(氮肥当季利用率)和PUE(磷肥当季利用率)显著高于其他处理(P<0.05),分别为52.15%和8.03%;-N+PGA处理下NUE(42.55%)显著高于CF(28.00%)和-N处理(28.48%),而PUE则无明显差别。
γ-PGA发酵液因没有涉及纯化等步骤,因此按照γ-PGA纯品成本价的80%计算。不同处理下小白菜种植的经济效益见表5。简要计算后结果表明,CF处理氮肥用量比-N处理多30%,而净产值只高出-N处理19.47%;-N+FJY处理的净产值为所有处理中最高,较CK增收约4.81万元·hm-2,较CF处理增收0.85万元·hm-2;与-N处理净产值相比,-N+PGA增加6.58%,-N+FJY增加26.93%,说明含有活性枯草芽孢杆菌属.A-5的发酵液处理有更高的经济效益。



结论
1. 与-N(减30%氮肥)处理相比,通过使用枯草芽孢杆菌A-5发酵制得的γ-PGA纯品和γ-PGA发酵液均可不同程度促进青菜生长,产量分别提高20.19%和37.63%;叶面积、植株养分含量也有提高,硝态氮含量显著降低,但-N+FJY处理效果更明显,说明-N+FJY(减30%氮肥+产γ-PGA发酵液)处理相较于-N+PGA处理具备更好的促生能力。
2. -N+PGA(减30%氮肥+γ-PGA纯品)和-N+FJY(减30%氮肥+产γ-PGA发酵液)处理下小白菜土壤总氮含量相较-N(减30%氮肥)显著提高(P<0.05),但两处理间未见显著差异,而-N+PGA和-N处理的含量较高;-N+FJY脲酶活性相较其他处理均显著提高(P<0.05);蔗糖酶活性为-N+PGA处理最高,其次为-N+FJY处理,两处理间未见显著差异(P>0.05),上述结果的产生原因推测是菌体生长代谢和γ-PGA的共同作用。减氮条件下,不同处理(-N、-N+PGA、-N+FJY)的土壤总磷含量、过氧化氢酶活性未见显著差异。
3. 在含有大量活性有益菌枯草芽孢杆菌A-5的γ-PGA发酵液处理下,N/P当季肥料利用率显著高于其他处理,较-N(减30%氮肥)处理高出23.67和4.13百分点,既实现了肥料的减施,又促进了植株对肥料的利用效率。另外,减氮30%并添加产γ-PGA发酵液处理的净产值高于-N、-N+PGA处理,可获得更高的经济收益,可见γ-PGA发酵液作为菌肥直接用于农业生产具有可行性。
引用
Effects of γ-polyglutamic acid fermentation solution on growth and nitrogen and phosphorus fertilizer utilization of Chinese cabbage
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