蔡司光学课 | 如何选择合适的物镜- 大数跨境

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蔡司光学课 | 如何选择合适的物镜

广州千江企业集团

2023-01-10

导读：选对物镜，认清物镜，让您Seeing beyond！

不知道您在使用显微镜的过程中有没有遇到过同样的经历，看不到，看不清，或者看着不像呢？

出现这种情况的很大原因是使用了不合适的物镜，所以，选择一颗正确的物镜对显微观察来说至关重要。

1866年，科学家Ernst Abbe加入蔡司公司，首次提出了完善的显微成像理论，并在此基础上将显微镜进行了模块设计，现代意义上的物镜就在此刻应运而生。随着显微成像技术的不断发展，物镜种类的不断增多，适用的范围也在不断扩展，但任何一颗物镜都有其自身的优势和局限性，无法满足所有样品观测的需求。蔡司君和您一起看看从实际样品出发，该怎样选择合适的物镜。

从样品本身来说，可以分为非荧光染色样品和荧光染色样品两大类，对于非荧光染色样品，往往是通过白光照明寻找感兴趣区域，而在此过程中可能会遇到一些困难。

贴壁细胞样品

由于贴壁细胞样品厚度薄且透光率高，很难直接观测到细胞轮廓。此时您可能需要选择增强对比度的方法和物镜来观测样品，如相差物镜：

相差PH物镜下的未染色细胞清楚 Plan-Apochromat 20x/0, 8 Ph2

非相差物镜下的未染色细胞不清楚 Plan-Apochromat 20x/0, 8

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具有折射性的样品

对于具有折射性的非荧光染色样品，如对骨骼，牙齿，晶体，淀粉粒及蛋固醇等进行观察时，您可能需要选择偏光物镜：

偏光物镜下的晶体 EC Plan-Neofluar 20x/0, 5 Pol

非偏光物镜下的晶体 EC Plan-Neofluar 20x/0, 5

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荧光标记样品

对于使用荧光染料或转染荧光蛋白标记的样品，通常使用宽谱激发光源配合荧光滤片等来观测不同波长的荧光信号，这类成像方法的特异性和对比度很好，但由于荧光信号强度较弱，想要更清楚地看到样品，就对物镜的光效率有一定要求，这时您要考虑选择荧光物镜。

荧光物镜下的肾组织切亮信噪比高 Plan-Apochromat 20x/0, 8

非荧光物镜下的肾组织切片暗信噪比差 N-Achroplan 20x/0, 45 Ph2

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而除了样品自身，实验过程中样品载具也对物镜有着各种各样不同的要求。

盖玻片封片样品

当您观测有盖玻片的样品时，由于盖玻片厚度（标准值为0.17mm）会对成像效果产生影响，因此需要使用盖玻片覆盖差是0.17的物镜：

盖玻片覆盖差是0.17mm的物镜清楚 Plan-Apochromat 40x/1, 4 ∞/0.17

盖玻片覆盖差是0的物镜不清楚 A-Plan 40x/0, 65 ∞/0

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无封片样品

当您观测无盖玻片样品时，则需要使用覆盖差是0的物镜：

盖玻片覆盖差是0的物镜清楚 A-Plan 40x/0, 65 ∞/0

盖玻片覆盖差是0.17的物镜不清楚 Plan-Apochromat 40x/1, 4 ∞/0.17

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多孔板培养的细胞样品

当您的细胞培养在培养皿或多孔板中时，对于厚度为0.17mm的玻璃底培养皿和多孔板，使用覆盖差是0.17mm的物镜即可，而对于底部较厚的培养皿和多孔板，可能会出现高倍物镜无法聚焦到样品上的情况，这是由于载具底板厚度超出物镜的工作距离造成的，这时就要考虑使用低倍物镜或长工作距离物镜：

LD-长工作距离物镜观察可以聚焦 LD Plan-Neofluar 40x/0, 65

非长工作距离物镜观察无法聚焦 Plan-Apochromat 40x/0, 95

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培养在溶液中的细胞样品

在使用培养皿或多孔板拍摄时，由于孔内加有培养液等液体试剂，进行高倍成像时还需要考虑物镜介质是否匹配，如在做水溶液中细胞三维成像时，水介质物镜比油介质物镜更适合，这样可以保证介质和样品溶液的折射率更加匹配，实际的成像效果会更好。而对于样品类型比较复杂的实验，也可选择多种介质混合物镜：