J Hepatol (IF=30)｜瑞因迈拓®与南方医科大学陈金军教授团队合作发表高分文章，阐述肝硬化急性失代偿期循环微生物特征

2022年10月26日，南方医科大学陈金军与Rajiv Jalan合作在Journal of Hepatology 杂志在线发表题为“Prognostic and therapeutic significance of microbial cell-free DNA in plasma of people with acutely decompensated cirrhosis”的研究论文。

该研究利用宏基因组下一代测序技术(mNGS)对肝硬化急性失代偿患者中循环微生物的基因组片段进行评估，结果表明NHVs可能在AD的复杂化过程中具有致病作用。需要进一步的验证来确定这是否应该纳入AD患者的日常管理。

瑞因生物集团下属公司瑞因迈拓®与南方医科大学陈金军教授团队合作完成项目中宏基因组/宏转录组的测序与分析工作，以及RNA验证实验的设计和验证工作。

肝硬化相关免疫功能障碍(Cirrhosis associated immune dysfunction, CAID)与急性失代偿(acute decompensation, AD)的进展相关，可影响细菌感染的死亡风险。CAID的潜在机制尚不清楚。CAID的严重程度随着肝硬化的严重程度而增加，并可在急性-慢性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure, ACLF)晚期患者中表现为免疫瘫痪。

ACLF是一种综合征，其特征是突发事件、多器官衰竭和全身炎症细菌感染，是AD患者最常见的诱发事件。在约30%的AD患者中，没有发现任何诱发性疾病考虑到肝硬化与CAID相关，有可能是除细菌引起的感染外的其他感染，如病毒感染作为诱因参与其中。尽管细菌感染对肝硬化的影响已被很好地描述，但非嗜肝病毒(non-hepatotropic virus, NHVs)感染的影响尚不清楚。

以前的研究集中在嗜肝病毒作为AD潜在沉淀剂的潜在作用。然而，非嗜肝病毒(NHVs)的感染，如单纯疱疹病毒、人巨细胞病毒、人细小病毒B19和EB病毒，已知会导致急性肝衰竭，其作用尚不清楚。

宏基因组新一代测序(Metagenomic next-generation sequencing, mNGS)是一种重要的不依赖培养的技术，可同时从临床样本中检测出几乎所有已知的病原体，对微生物细胞游离DNA (cell-free DNA, cfDNA)进行测序可以用于感染诊断。mNGS在肝硬化患者中的临床应用相关研究较少。本研究的主要目的是通过对血浆微生物cfDNA进行测序，综合评价急性失代偿肝硬化患者循环微生物基因组片段，并将其与临床结果联系起来。次要目的是验证CMV再激活的潜在作用，一种已知的NHV与现有的抗病毒药物在确定失代偿肝硬化患者的预后。

在这项研究中，研究人员对129例肝硬化AD患者行血浆mNGS检测。其中10名健康志愿者和20名、39名和81名稳定型肝硬化、严重脓毒症和恶性血液病患者分别作为对照。在一个验证队列(n = 58)中进行了人类巨细胞病毒(cytomegalovirus, CMV)再激活的验证分析，并进行了探索性治疗。结果表明，研究队列中74.4%(96/129)例患者检出188种微生物，包括病毒(58.0%)、细菌(34.1%)、真菌(7.4%)和衣原体(0.5%)。

有趣的是，AD患者具有NHV特征，CMV是最常见的NHV，这与经验抗生素治疗的临床效果、进展为急性-慢性肝衰竭(ACLF)和90天死亡率相关。ACLF患者的NHV特征与脓毒症和恶性血液病患者相似。在验证队列中，有24.1%(14/58)患者检测到可治疗的NHV、CMV。在14例mNGS检测到CMV的病例中，9例通过DNA RT-PCR或pp65抗原检测进一步验证。3例巨细胞病毒再激活患者接受更昔洛韦探索性治疗，临床疗效明显。

这项研究的一个重要发现是，在ACLF患者中观察到的NHV特征与脓毒症或血液系统恶性肿瘤患者相似，且NHV特征与临床结果相关。血浆mNGS鉴定出了已知可引起人类慢性感染的NHV的各种基因组片段，如CMV、EBV、TTV和人类细小病毒B19。在这项研究中，CMV病毒血症是最常见的，并与急性失代偿性肝硬化的进展有关。巨细胞病毒可导致胆汁淤积，肝损伤恶化，门静脉血栓形成和肺炎，可增加全因死亡率。由于缺乏肝脏或肠道组织学等特异性组织损伤的数据，目前的研究无法诊断CMV感染是否与CMV疾病相关。

综上所述，该研究使用了针对循环微生物基因组片段的非靶向血浆mNGS方法，并提示AD患者，尤其是ACLF患者具有明显的NHV特征，这可能使AD的病程复杂化，这一观察结果在另一项前瞻性研究中得到了验证。未来还需要进一步的细化和验证来定义测试的临床意义的NHVs AD患者的日常管理。