实时震颤诱导转化法检测朊病毒播种

RT-QuIC 检测法用于估算朊病毒接种的相对数量。该检测法通过测量样本的连续稀释，统计估算接种剂量（SD）。在该检测中，极少量的传染性朊病毒会被添加到正常的朊病毒蛋白中，从而引发或导致朊病毒蛋白发生类似疾病的错误折叠。测定方法是通过测量样本的系列稀释度并确定接种活性损失（SD50），即终点稀释度来进行量化。

使用软件脚本对RT-QuIC检测进行了20至68小时的测量，数据取自8个重复孔的相对荧光单位平均值。每个图表仅显示每45分钟的数据。

FLUOstar Omega酶标仪除了线性振荡和轨道振荡外，还能以独特的双轨道振荡模式进行振荡。在整个测量期间，孵育温度保持在42°C。Omega系列的高品质设计和坚固的制造使研究人员能够连续测量数天，而不会中断振荡或产生温度波动。数据被不间断地收集并输出到BMG LABTECH的数据分析软件（MARS）和Excel中。

图 1 和图 2 展示了 RT-QuIC 检测法与仓鼠豚鼠脑匀浆（BHs）的关系。图 1 使用的是接种后 80-85 天（DPI）的仓鼠脑匀浆样本，而图 2 使用的是接种后 10 天的仓鼠脑匀浆样本。

图 1：RT-QuIC 灵敏度：对 263K 仓鼠脑匀浆稀释液的分析。

50% 接种剂量（SD50 ）是指在半数重复孔中产生足够增强的 ThT 荧光的量。在本例中，用 10E-9 稀释的刮伤病 BH 储存液（深蓝线）的 2 μl 等分试样（接种量）就能达到近似的 SD50 。因此，Spearman-Kärber 估计的 SD50 /2μL 为 10E9.1，SD50 /g 为 10E12。该 SD50 的对数（~11）与生物测定中发现的 LD50 的对数（~10）非常吻合。

图 2：对三种 263K 接种临床前注射后 10 天的仓鼠 BH 进行 RT-QuIC 终点稀释分析。

在此情况下，约50%的播种剂量（SD50）通过2 μl的10E−5稀释度的瘙痒症接种后10天263K BH原液（绿色曲线）实现。其SD50/2μL为10E5.5，SD50/克组织为10E8.2。

正如预期，接种后85天（DPI）样本的SD50/克组织（10E12）高于接种后10天的样本（10E8.2），因为有更长的发病时间。这些RT-QuIC结果与生物测定结果高度相关。数据表明，RT-QuIC检测可视为一种比整动物生物测定更快速、更高通量的替代方法，同时也表明接种后仅十天的动物样本即可用该方法进行检测。