眼部疾病，如年龄相关性黄斑变性(AMD)、青光眼和糖尿病视网膜病变是视力损害和失明的主要原因。据预测，由于人口老龄化，未来20年全球视网膜疾病患者数量将增加约45%。现有的抗血管内皮生长因子和抗炎药物通常用于治疗后段眼病，但生物屏障严重限制了它们的治疗效果。因此，为了克服药物难以接近靶点的问题，大多数治疗视网膜疾病的药物都是通过玻璃体内注射给药的。虽然小分子可能会渗透到整个视网膜层，它们受到药物快速清除的影响，因此需要频繁注射，有极大的感染风险。另一方面，大分子和纳米药物的视网膜渗透性较低，因此需要改进给药方法以获得治疗效果。
意大利科研人员对眼内递送地塞米松的脂质体进行表面特性的研究。本研究开发了具有工程化的表面脂质体，以控制其在玻璃体和视网膜中的扩散。该研究中使用Apogee Flow System纳米流式分析和评估玻璃体中荧光素标记并加载DH（地塞米松）脂质体的胶体稳定性。氢化大豆磷脂酰胆碱(HSPC)/胆固醇脂体包被合成的非肽细胞渗透增强剂(CPE) (Agm6-M-Oleate) (Agm6-M-Oleate)和/或5%的mPEG2kDa-DSPE。随着Agm6-M油酸盐包被浓度的增加，脂质体的zeta电位升高，在牛玻璃体中的迁移率和胶体稳定性降低。相反，mPEG2kDa- DSPE降低了脂质体的zeta电位，恢复了脂质体在玻璃体中的扩散性和稳定性。
ApogeeFlow纳米流式细胞术的大角度光散射(LALS)分析评估玻璃体中荧光素标记并加载DH的脂质体胶体稳定性。该仪器可区分玻璃体大分子和荧光标记脂质体的信号。图5A显示了荧光标记的脂质体的数据，这些脂质体在从玻璃体组分信号中去除后圈门。在0天时LALS值不同表明不同细胞穿透增强剂与玻璃体的相互作用不同，特别是5% Agm6-Lipo和mPEG/5% Agm6-Lipo的起始值高于Naked-Lipo和mPEG- lipo，这表明它们在玻璃体中发生了迅速的粒径变化。Naked- Lipo和mPEG-Lipo的LALS信号没有随着时间的推移而增加，表明这些囊泡的大小在玻璃体中是稳定的。相反，5%Agm6-Lipo的LALS信号在20天内增加了约50%，表明脂质体在玻璃体中逐渐聚集。值得注意的是，通过包被mPEG-DSPE5%后的Agm6-Lipo显著降低了LALS信号的增加，表明玻璃体中脂质体具有显著的PEG保护作用，这也可以最大限度地减少给药后对视力的干扰(图5B)。
Fig.5
Fig.5所示。37℃玻璃体中载DH脂质体的稳定性。A.脂质体的ApogeeFlow流式图。B. 脂质体在大角度散射光信号与时间的相关性。
图7-i中报告的细胞荧光结果显示，加载DH的脂质体的表现与空白脂质体相似;阳离子脂质体比中性脂质体具有更高的细胞关联性。这证实了药物装载不影响囊泡表面，DH不吸附在脂质体表面。用共聚焦显微镜观察了加载DH脂质体在培养的ARPE19细胞中的内化作用。Fig.7-ii A-B显示，与不含DH的脂质体相似，加载DH的Naked-Lipo和mPEG-Lipo不被细胞关联或摄取。相反，5%Agm6-Lipo和mPEG/5%Agm6-Lipo显示出显著的细胞关联和对细胞质的处置(图7-ii C-D)。然而，这些配方显示出不同的细胞结合和进入模式。5%Agm6在细胞表面或细胞质中形成大的聚集体，而mPEG/5%Agm6-lipo进入细胞质空间，产生小的荧光点，与不含DH的对应物相似。因此，mPEG涂层似乎可以减少阳离子脂质体在细胞膜附近的聚集，从而促进细胞摄取。
Fig.7
Fig.7在三种脂质体浓度下，加载DH的荧光素- DHPE标记脂质体孵育ARPE-19细胞的平均荧光强度。数据以Mean±S.D. (n = 3)表示。与加载DH的Naked-Lipo进行统计分析。ii) 共聚焦显微镜下的ARPE-19细胞与载DH的Naked-Lipo (A)、mPEG- lipo (B)、5%Agm6-Lipo (C)、mPEG/5%Agm6-Lipo (D)共聚焦显微镜下的图像。
所有配方均表现出双相行为，在前24小时内快速释放，随后缓释超过30天。这种行为可以解释为可以迅速释放的非络合DH和缓慢释放的与Ca2+络合的DH之间的平衡。释放曲线表明，表面处理后的脂质体影响DH的释放。5%Agm6-Lipo与Naked-Lipo相比，释放速度更快，这表明插入后的寡位置脂质部分可能会影响双层结构，使其更具渗透性。
Fig.8
Fig.8脂质体释放DH。数据以Mean±S.D. (n = 3)表示。
结论：本研究报告的结果表明，合成的细胞渗透增强剂(CPE)和mPEG的结合可以成功地用于控制胶体药物递送系统在玻璃体内表现。我们在这里已经证明，Agm6和mPEG在脂质体表面的结合可以实现在玻璃体中的扩散，在玻璃体内治疗时可以达到视网膜治疗的目的。用mPEG包裹Agm6修饰的脂质体，在体外和体内提供了有效的治疗抗炎效果，这是由多种因素共同作用的结果，包括高效的细胞内药物传递和低细胞毒性的载体。另一方面，mPEG和Agm6对脂质体/细胞膜的相互作用、内吞作用和细胞内运输的调节机制的影响还需要进一步的研究。
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