BMG使用小贴士（一）：如何优化微孔板读板机的增益设置？

你知道吗？
增益设置是影响微孔板读数机测量范围的主要参数，即读板机可以量化的最亮和最暗强度之间的比率。

你知道吗？
增益设置具有人为设置的范围。不同制造商的读板机之间的这个范围不同，这妨碍了测量值的直接比较。
然而，最大增益总是代表最高可能的信号放大。

吸光度、荧光和发光是基于微孔板的测定中最常用的三种检测方法。与吸光度不同，荧光和发光不是绝对测量，而是取决于一个称为“增益”的人工参数。

但增益设置是什么？它究竟如何影响你的测量？简单地说，增益设置调节微孔板读板机的测量范围。这是一个定义微孔板读板机检测系统对入射光信号放大的因素。

图1：微孔板读板机的动态范围

高增益设置提供了大的光信号放大，适用于产生弱信号的样本。相反，低增益设置放大的样本信号较少，适用于产生非常强的光信号的样本。因此，为所测试出样本选择适当的增益设置对于获得最佳结果至关重要。

图2：增益设置对标准曲线的影响

在该案例中，在不同的增益设置下测量荧光基团标准曲线（1pM至100nM）。通过微孔板读板机自动确定的最佳增益为589。增益设置高于最佳值589（比如增益700和900的曲线）导致检测器在高样品浓度下过饱和。如果出现过饱和，数据点将被记录并显示为可能的最高值（本读板机是260000）。虽然低于最佳值589的增益设置（比如增益500和增益550的曲线）解析了标准曲线的所有数据点，但较低标准样品和空白样品之间的区分越来越困难。

不适当的增益设置将对数据质量、分析窗口和灵敏度产生负面影响。如果用高增益测量强信号的样本，这可能导致检测器饱和导致数据不可用（图2）。相反，如果用低增益检测微弱信号，它们可能与背景噪声无法区分（图3A）。如果您想比较多个测试的数据，建议在保持相同实验条件的同时，对每次测量使用相同的增益设置。

你知道吗？
通过对全板进行增益调整，微孔板读板机识别出定义的板布局中产生最强光信号的孔，并相应地调整增益设置。

图3：增益设置对信号强度（A）和信噪比（B）的影响

增益从最佳值（增益589）设置得越低，100nM荧光团标准的值（蓝色柱；图3A）将越接近空白样品的值（橙色柱；图3A）。相反，当使用高于最佳增益设置时，空白样品的测量值接近过饱和值和100nM荧光团标准样品值。最佳增益设置提供了最佳的信噪比，这是数据质量的一个重要指标。当远离最佳增益时，该比率相应地减小（图3B）。

你知道吗？
VANTAstar®和CLARIOstar®Plus读板机上的增强动态范围（EDR）功能可用于在整个测量过程中连续自动调整增益设置。

如何调整BMG LABTECH读板机的增益设置？

BMG LABTECH读板机的增益设置可以在选择测试程序后，即测量开始前进行调整。只需选择一个样本孔（或多个孔）进行增益调整，选择固定范围（增益），然后单击“开始调整”按钮。

一般来说，增益调整应在预期产生最强光信号的样本孔上以90%的目标值执行。通过这种方式，可以适当地记录和描绘测量的所有数据点。然而，这并不总是可行的，因为在动力学测量中产生的光信号可能随时间而变化。在这种情况下，建议将空白样品的读值的10%作为起点。测量的目标值（请参阅“如何调整BMG读板机的增益设置”）可以以1%的增量进行调整，以微调记录信号的强度。

由于当使用低于最佳值的增益设置时，测试样品的测量值与空白值变得越来越难以区分，因此测定的检测限（LOD）相应地受到影响并增大。在这个例子中，可以使用589的最佳增益设置来获得3.9 pM的LOD，而将增益设置降低到300时已经将LOD增加到481.3 pM。越低的增益设置会导致测量数据与线性度的进一步偏差，低于300的增益值会导致灵敏度的进一步降低，通常不建议使用。

结论
增益设置是为您的分析选择最佳测量窗口的一个重要参数。如果设置正确，增益设置将增强信号与背景的比率以及测量灵敏度，并确保测试的所有数据点都被正确记录。

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