神经退行性疾病研究系列(二): 怎样利用微孔板读板机研究蛋白错折叠

• 蛋白错折叠与神经退行性疾病相关。
  

• 如何使用微孔板读板机来揭示蛋白错折叠对神经退行性疾病的影响。

许多神经退行性疾病都与蛋白质错误折叠有关。比如朊蛋白错折叠对朊病毒疾病起到关键作用，阿尔茨海默病涉及大脑中存在两种错误折叠的蛋白质：β淀粉样蛋白和tau蛋白，帕金森病的典型特征是大脑中α-突触核蛋白的积累，亨廷顿舞蹈症是由一种异常形式的亨廷顿蛋白引起的，错误折叠的亨廷顿蛋白形成淀粉样蛋白聚集体，在神经元中积聚，进而导致神经元功能障碍和细胞死亡。

相比较于超微结构成像、免疫化学方法，微孔板读板机无疑是通量最高、检测速度最快的蛋白错折叠检测工具。

蛋白错误折叠循环扩增（Protein Misfolding Cyclic Amplification, PMCA）

PMCA技术使用重复的超声处理和孵育循环将细胞朊病毒蛋白从正常脑基质转化为聚集形式。美国Amprion公司使用独有的蛋白错误折叠循环扩增技术，检测脑脊液和血浆中的α-突触核蛋白水平来早期诊断帕金森病。这套方法在BMG Labtech 多功能酶标仪内完成高速震荡、孵育以及ThT荧光读板检测错折叠蛋白的聚集。

震荡诱导蛋白转化的实时检测Real-Time Quaking Induced Conversion Assay(RT-QuIC) 

RT-QuIC是美国 NIH 科学家 Dr.Caughey 和 Dr.Atarashi 在 2008 成功研发出朊病毒快速检测技术，采用ThT探测蛋白错折叠。该技术可在 20-68 小时内可检测出朊病毒，并且可做到零假阳性的准确度。RT-QuIC测定为检测生物样本中感染性朊病毒的存在提供了高灵敏度和特异性。此外，RT-QuIC测定非常适合在早期感染动物和自然传播条件下进行测试。

PA-QuIC系列酶标仪，备受广泛认可的RT-QuIC标准分析仪器。德国BMG LABTECH公司的PA-QuIC系列酶标仪是用于检测朊蛋白聚集最常用和引用次数最多的酶标仪。2021年欧洲疾控中心发布了检测克雅氏病的实时检测诱导蛋白转化标准方法，选用了BMG公司的Omega系列进行检测。

朊病毒RT-QuIC定量分析是神经退行性疾病蛋白聚集检测的典型检测应用，目前在世界范围内，超过90%的用户都在使用PA-QuIC系列仪器来检测。由于该仪器型号采用德国加固工艺制造，拥有非常坚固稳定的表现性能，专为长时间蛋白聚集优化设计，在长时间连续高转速振荡情况下，表现性能最为稳定，可在50℃高温，最高转速1100rpm条件下，连续振荡时间至少可达100小时以上。这种高转速高温长时间连续振荡特点，最适用于朊病毒RT-QuIC定量分析以及其他神经退行性疾病蛋白聚集长时间动力学检测实验。

总结

德国 BMG Labtech 公司PA-QuIC系列酶标仪拥有多项检测功能，当中包括荧光、化学发光、吸收光和时间分辨荧光等。精密的德国工艺设计和稳定耐用的特性，使得PA-QuIC系列酶标仪已成为全球蛋白聚集研究用户的最佳选择。