在2024年发表的一项开创性研究中，波兰雅盖隆大学的研究团队揭示了一种使用聚电解质冷冻保存细胞外囊泡（EVs）的新方法。这一创新方法有望显著提高EVs的稳定性和功能性，这对于包括组织再生和药物递送在内的各种生物医学应用至关重要。
主要发现：
研究表明，用生物相容性聚电解质（特别是PEG46-b-PMAPTAC52（P1）和PAMPS18（P2））的超薄层包被EVs，可以有效保持其结构完整性和生物活性，在长期储存表现出色和多次冻融循环中。涂层EVs显示出更好的稳定性，能够比未涂层的EVs更好地保持其尺寸和浓度。这种稳定性对于确保EVs疗法的有效性至关重要。此外，涂层EVs保留了其对靶细胞（如人类成骨细胞）的积极影响，展示了其在治疗应用中的潜力。
Apogee Flow纳米流式细胞仪的应用：EVs分析中的重要工具
Apogee Flow纳米流式细胞仪在这项研究中发挥了关键作用，提供了高分辨率的EVs分析。以下是它如何助力研究成功的：
精确和灵敏度：Apogee Flow纳米流式细胞仪的先进功能允许精确测量EVs的尺寸、浓度和表面标记，确保了聚电解质冷冻保护效果的准确评估。
高分辨率分析：其检测和分析小颗粒（如EVs）的高分辨率能力对于验证涂层包被EVs的完整性和功能性至关重要。
数据可靠：Apogee Flow纳米流式细胞仪的稳健性能确保了数据的一致性和可靠性，这对于开发EVs冷冻保存的标准化过程至关重要。
实验结果：
首先在EVs表面包被一层PEG46-b- PMAPTAC52层（P1），该层沉积在EVs表面，主要通过EVs负电荷表面与带正电荷的聚合物之间的吸引静电相互作用来稳定电动汽车。为了增加这种保护囊泡的稳定性，提高其生物相容性和水分散的稳定性，在EVs上额外包被聚阴离子PAMPS18 (P2)，共同形成P1/P2双层涂层。
图1.聚合物的超薄P1层或P1/P2双分子EVs涂层示意图。
实验结果显示，与新分离的EVs相比，在单次冻融循环后，无论是未包被的EVs，还是包被P1和P1/P2的EVs，RNAselect阳性物体的百分比都有所增加（图2C）。Apogee Flow纳米流式分析比较发与新分离的EVs相比，P1和P1/P2包被的EVs单次冻融后，CD81阳性和CD90阳性物体的百分比均显著高于新分离的EVs，这表明聚合物的保护作用(图2C，图2 D)。
图2.(C)流式细胞术分析冷冻保护剂对EVs完整性的影响，通过RNASelect染色评估，以及EVs典型抗原（CD81）和间充质细胞（CD90）的存在。(D)一次冻融循环后，Ctrl样品（无聚合物）和包被P1聚合物的EVs的代表性点图。
在10次冻融循环后，对照组（未包被）样品的平均颗粒尺寸略低，在20次冻融循环后，颗粒尺寸显著减小，这可能表明囊泡部分解体（图7A）。与未冻融的样品相比，经过10次和20次冻融循环后，包被P1/P2的EVs样品的平均颗粒大小没有明显变化（图7A）。Apogee Flow流式细胞术分析证明，与未冻融的EVs样品相比，涂有P1/P2并经过10或20个冻融循环的EVs样品中RNAselect阳性颗粒的百分比明显更高，而未涂有P1/P2的EVs样品没有观察到这种显著的影响（图7B）。
图7.P1/P2存在对EVs多次冻融的影响。
结论：本文提出了一种有效、安全的低温保护hUC - MSC衍生EVs的新方法，该方法基于生物相容性聚电解质的超薄层逐层涂层技术。利用Apogee Flow高分辨率流式细胞术、蛋白质组学和体外功能分析等互补的定量和定性方法，证明了P1层或P1/P2双分子层包被的EVs在深度冷冻和解冻时可以保护其结构完整性和生物学功能。蛋白质组学分析证实，在EVs冻融前包被P1/P2双分子层可以保护其蛋白质分子。该研究的方法是为基础研究和临床应用开发EVs长期存储标准化程序的重要一步。Apogee Flow纳米流式细胞仪的使用突显了高质量分析工具在实现这些科学突破中的重要性。
Apogee Flow纳米流式细胞仪的优势
Apogee Flow纳米流式细胞仪具有多项优势。首先，它具有高灵敏度检测能力，能够检测到小至100纳米的颗粒，这对于分析细胞外囊泡、病毒和亚细胞结构等微小颗粒非常重要。其次，仪器配备多达四个空间分离的激光器和12个光学检测器，能够进行复杂的多参数分析。此外，Apogee Flow纳米流式细胞仪具有高通量能力，能够每秒处理多达100,000个事件，适合高通量分析。它还支持96孔微孔板自动进样器，实现高通量和重复性分析，适合各种应用。最后，仪器支持GxP合规，包括自动校准和清洗功能，确保长期稳定性和可靠性。
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