利用OD600测定抗生素的最小抑菌浓度（MIC）

将大肠杆菌（Escherichia coli, E. coli）培养物解冻后，于37°C条件下在200 mL Luria-Bertani（LB）肉汤中培养18小时。取100 µL菌液加入50 mL新鲜LB肉汤中，制备E. coli工作液。

将庆大霉素（Gentamicin）与氨苄西林（Ampicillin）分别溶解于无菌水中，经0.22 µm孔径滤膜过滤灭菌后，在LB肉汤中稀释制备抗生素母液。随后进行两倍梯度稀释，每种抗生素梯度中的100 µL液体转移至96孔板中（每组设4个重复孔）。再加入100 µL E. coli工作液至各孔中。抗生素的最终浓度范围为0.1–50 µg/mL（见图2）。

作为阳性生长对照（Growth Control, GC），取100 µL E. coli菌液与100 µL LB肉汤混合。空白对照孔（Blank, B）仅加入200 µL LB肉汤，代表检测背景。

未添加抗生素物质、仅含有大肠杆菌的 GC 孔随时间推移，OD600 值显著增加。培养物表现出典型的生长迟缓期。与抗生素处理过的样品相比，OD600 值随时间推移逐渐降低，降低幅度与所用抗生素浓度成正比（图 3）。

图3：添加庆大霉素或氨苄西林后E. coli的OD600动态变化曲线（12小时），所有OD600读数均经空白对照校正并进行了平滑处理。

在12小时孵育后，通过比较各孔OD600值，判定是否存在细菌生长。凡OD600值超过空白孔平均值的3个标准差（SD）者，判定为生长阳性（见表1），据此确定MIC值。

表 1：根据 12 小时后的 OD600 值对有无生长的大肠杆菌样品进行分类

总而言之，在酶标仪上测量 OD600 值是一种快速、可靠且客观的方法，可用于测定抗生素物质的 MIC 值。配备 紫外可见光测量选项的酶标仪可同时测定多个样品中的细菌生长情况，从而为测定 MIC 提供了一种实时、免操作的解决方案。BMG LABTECH 读数器允许微生物在 65°C 的温度范围内生长。使用可选的 大气控制单元 (ACU)，还可以评估包括对培养环境中氧气和二氧化碳气体浓度有特殊要求的苛刻微生物在内的微生物。

此外，BMG配套的MARS数据分析软件可通过预设模板自动识别是否存在菌落生长，简化后续MIC值的判定流程，避免人工主观分类误差，提高分析效率。