研究还发现，已建立的运动因子（如乳酸、γ-氨基丁酸（GABA）、3-氨基异丁酸(BAIBA)、犬尿氨酸、犬尿喹啉酸、5-氨基咪唑-4-甲酰胺核糖核苷酸(AICAR)、α-酮戊二酸(α-KG)等）之间存在基线、运动时间和组织依赖性差异，在ZT15时反应更大(图5A)。在ZT15时，肌肉和肝脏中乳酸减少，而α-KG和犬尿氨酸增加。犬尿喹啉酸仅在在ZT15的肝脏中增加。在ZT15时运动，血清、肝脏、心脏和HT的BAIBA增加。心脏AICAR和血清α-KG在ZT3运动时增加。

ZT15的运动可能优先指导骨骼肌S-腺苷甲硫氨酸(SAM)代谢向腺嘌呤核苷酸回收、谷胱甘肽(GSH)产生及胞质NAD+/NADH维持相关的转导途径(图5B和5C)。在ZT15时运动降低了肌肉、肝脏和心脏的SAM水平。在肌肉中，运动降低了下游SAM代谢物S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)、5-甲基硫腺苷(MTA)、腺苷和GSH，而GSSG/GSH的比例增加。肌肉腺嘌呤和5’-AMP仅在ZT15时通过运动增加。腺嘌呤向AMP的转化可以通过5-磷酸核糖-1-焦磷酸(PRPP，在ZT15，不运动肌肉中增加，而通过运动而减少)的有效性来增加。研究结果表明，运动诱导的腺嘌呤核苷酸回收在肌肉内以时间依赖性方式局部调节。

▲ 图5：运动诱导代谢产物的时间和组织依赖性联系

为了进一步阐明骨骼肌AMPK在运动时的时间依赖性激活，确定了营养状态如何影响腺嘌呤核苷酸代谢。为了模拟不同营养状态下的运动，研究人员在不存在或存在葡萄糖的情况下对肌管进行电脉冲刺激(EPS)，采用LC-MS测量了腺嘌呤核苷酸和腺苷（图5E）。在葡萄糖耗尽的条件下，EPS提高了AMP的产生，减弱ATP的再生，即ZT15的运动增加了肌肉AMP水平和AMPK的激活(图5C和5D)。

为了深入了解组织之间的动态代谢物交换，研究人员在一天的不同时间对小鼠进行了锻炼，并分析了后肢肌肉和肝脏（从门静脉到肝静脉）中代谢物的动静脉差异。收集①来自门静脉和腔静脉（主要是肝静脉）的血清和肝脏；②动脉、静脉血清和骨骼肌。在每个组织中检测到数百种代谢物和相关途径，它们具有时间和运动依赖性的动静脉(A/V)差异(图6)。在ZT3时，肝脏释放AAs、脂质、核苷酸、碳水化合物、TCA循环中间体以及各种维生素和辅助因子，同时也摄取脂质、AAs和核苷酸(图6)。在ZT3时，肝脏摄取和释放增加，但在ZT15时减少。肌肉摄取较多AAs、脂质、碳水化合物、核苷酸和其他能量代谢物，释放的代谢物比摄取少20~50%。在ZT15不运动时，肌肉代谢物平衡的净变化很小，然而，随着运动，净代谢物摄取增加到ZT3水平。

▲ 图6：定时运动对肝脏和肌肉动静脉(A/V)的反应差异

将所有A/V肌肉和肝脏代谢物与组织代谢物谱相关(图4A)，揭示了组织间代谢物流动的方向与耦合代谢过程的关系。ZT3运动后相关性的增加主要是由肌肉和肝脏之间的代谢物交换引起。ZT15运动后相关性的增加反映了肌肉和肝脏对代谢物的协调释放。