杂志名称：PNAS

影响因子：9.4/Q1

文章题目：CD73 promotes non-small cell lung cancer metastasis by regulating Axl signaling independent of GAS6

第一作者：朱健洁

通讯作者：黄建安，刘泽毅

作者单位：苏州大学等

本实验所用组技术：

① 单细胞测序

② 磷酸化多因子检测芯片：AAH-PRTK（检测人源样本中71个RTK通路微量蛋白）

③ 单靶标ELISA检测：ELH-5NTE（Human 5'-Nucleotidase/CD73 ELISA Kit）

检测样本：细胞裂解液

原文链接：https://doi.org/10.1073/pnas.2404709121

结果1

CD73增强细胞在NSCLC中的迁移和侵袭

单细胞测序、CD73敲低和过表达细胞Transwell实验、伤口愈合实验、CD73对NSCLC体内转移影响的体内实验，都表示了CD73具有介导细胞迁移及侵袭的能力。

结果2

CD73与NSCLC组织和细胞系中Axl活化相互作用并诱导其活化

利用AAH-PRTK磷酸化多因子检测芯片检测细胞裂解液，发现与对照细胞相比，cd73敲低细胞中的Axl磷酸化下调（a）。之后在WB实验、Co-IP、免疫共沉淀实验中，都证实了cd73表达改变会影响Axl磷酸化水平，且存在直接的互作关系。

结果3

可溶性CD73可以直接与Axl结合，从而诱导Axl活化

CD73过表达后在细胞上清中的浓度增加，且在淋巴结转移的肺癌患者血清中高表达。BIAcore实验、GST下拉试验结合SDS-PAGE和WB分析鉴定表明Axl的n端胞外结构域可以直接与CD73结合，且不受Axl公认的受体激活配体GAS6的影响。

结果4

CD73通过抑制E3泛素连接酶CBLB的表达来稳定Axl的表达，且可通过Smad3促进NSCLC细胞转移信号通路。

用CHX处理过表达cd73的A549和H226细胞，抑制蛋白合成后发现细胞中CD73的过表达延长了Axl蛋白的半衰期。

KEGG通路分析显示，Axl与TGF-ß通路相关，WB结果显示，CD73敲低后，pSmad3、Snail、MMP2、MMP9、N-cadherin和Vimentin均下调。