导读
溶菌酶已广泛应用于食品、日化、医药、保健、保鲜等领域，表现出优秀的药理、保健、防腐三大主要功能；溶菌酶相关的标准有哪些？食品、药品、饲料中的溶菌酶涉及到哪些检测（活性和含量）方法？有何不同？
QB/T 5030-2017 《溶菌酶》规定了溶菌酶的产品分类、要求、试验方法、检验规则和标志、包装、运输及贮存，适用于微生物源或从蛋清中经提取、精制等工艺制得的溶菌酶。
GB 1886.257-2016 《食品安全国家标准 食品添加剂 溶菌酶》适用于以鸡蛋清为原料，经提取、精制等工艺制得的食品添加剂溶菌酶。
抗氧化剂（39个）、增味剂（10个）、甜味剂（25个）、乳化剂（50个）、膨松剂（35个）、稳定剂（68个）、增稠剂（61个）、护色剂（7个）、酸度调节剂（50个）、面粉处理剂（4个）、着色剂（79个）、其他（17个）、防腐剂（39个）、被膜剂（15个）、抗结剂（35个）、凝固剂（33个）、水分保持剂（28个）、漂白剂（7个）、胶姆糖基础剂（1个）、消泡剂。
| 防腐剂（39个） | ||
| 防 腐 剂 39 个 |
ε-聚赖氨酸 | 硫磺 |
| ε-聚赖氨酸盐酸盐 | 肉桂醛 | |
| 苯甲酸 | 乳酸链球菌素 | |
| 苯甲酸钠 | 硝酸钠 | |
| 丙酸 | 硝酸钾 | |
| 丙酸钠 | 亚硝酸钠 | |
| 丙酸钙 | 亚硝酸钾 | |
| 单辛酸甘油酯 | 纳他霉素 | |
| 对羟基苯甲酸甲酯钠 | 液体二氧化碳(煤气化法) | |
| 对羟基苯甲酸乙酯 | 乙氧基喹 | |
| 对羟基苯甲酸乙酯钠 | 溶菌酶 | |
| 二甲基二碳酸盐 | 山梨酸 | |
| 二氧化硫 | 山梨酸钾 | |
| 焦亚硫酸钾 | 双乙酸钠 | |
| 焦亚硫酸钠 | 乙酸钠 | |
| 亚硫酸钠 | 脱氢乙酸 | |
| 亚硫酸氢钠 | 脱氢乙酸钠 | |
| 低亚硫酸钠 | 稳定态二氧化氯 | |
| 二氧化碳 | 乙二胺四乙酸二钠 | |
| 联苯醚 | ||
| 注意 | 2,4-二氯苯氧乙酸（已去除） | |
2020年4月9日，国家市场监督管理总局及中国国家标准化管理委员会发布批准了包括GB 38850-2020《消毒剂原料清单及禁限用物质》，规定了消毒剂可以使用的85种原料活性物质、115种原料惰性成分等原料清单，以及禁止使用、限制使用的物质清单，从源头控制消毒剂的有毒有害物质含量。有关溶菌酶的相关规定：人类药用的疫苗、血清或毒素及其制品等用于产生主动或被动免疫的制剂、用于诊断免疫状态的制剂(溶菌酶、溶葡萄球菌酶除外)。
国际方面：2018年7月12日，欧盟委员会发布法规（EU）2018/991，根据欧洲议会和理事会法规（EU）2015/2283，授权将鸡蛋清溶菌酶水解物（hen egg white lysozyme hydrolysate）作为新食品成分用于成人食品补充剂，并修改欧盟委员会实施细则（EU）2017/2470附件，规定了在指定食品类别中该物质最大使用限量为1000 mg/天且产品标签需标识。本法规在欧盟官方公报公布后20天生效。
目前在饲料添加剂品种目录中的酶制剂共有18项，可大体将其分为两大类：消化酶和非消化酶。
饲料添加剂目录从2013版到2018版，增加了“溶菌酶”，并扩大溶菌酶的适用范围至犬、猫。
饲料添加剂品种目录（2018年增补）
名称 |
适用范围 |
功效 |
条件 |
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酶制剂 |
β-半乳糖苷酶（产自黑曲霉） beta-Galactosidase (Source: Aspergillus niger) |
犬、猫 |
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最适PH值：5.0 最适温度：50-55℃ |
菠萝蛋白酶（源自菠萝） Bromelain (Source: Ananas spp.) |
犬、猫 |
菠萝蛋白酶属于巯基蛋白酶,是存在于菠萝茎和果实中的一类蛋白水解酶的总称，可提高蛋白的利用率。 |
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木瓜蛋白酶（源自木瓜） Papain (Source: Carica papaya) |
犬、猫 |
木瓜蛋白酶是从种植的番木瓜未成熟果实中割取乳液经采用生物技术精制而成的天然混合生物酶制剂，其中含木瓜蛋白酶、木瓜凝乳酶、木瓜肽酶，等其主要成分为木瓜蛋白酶，由212个氨基酸组成，属于含疏基﹙—SH﹚肽链内切酶，其主要催化蛋白质水解，切割分解点全面。分解饲料中的蛋白质成氨基酸，提高饲料营养的渗出量，同时补充动物内源酶不足，增强食欲，促进动物生长，增加饲料利用率及降低饲料成本，进而提高日增重及成活力 |
最适PH值：7.0-8.0 最适温度：50-55℃ |
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溶菌酶（源自鸡蛋清） Lysozyme (Source: Egg-whites) |
扩大适用范围至犬、猫 |
溶菌酶（Lysozyme，EC3.2.1.17）又称细胞壁质酶（Murami dase）或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶（N-Acetyl muramide lycanohydralase），抗菌消炎，抗病毒，增强免疫力。 |
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酶制剂 |
胃蛋白酶（源自猪、小牛、小羊、禽类的胃组织） Pepsin (Source: Hog, |
犬、猫 |
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- |
胰蛋白酶（源自猪或牛的胰腺）Typsin（Source: Porcine or Bovine Pancreas） |
犬、猫 |
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名称 |
适用范围（底物） |
功效 |
反应条件 |
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酶制剂2 |
淀粉酶（产自黑曲霉、解淀粉芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、长柄木霉3 、米曲霉、大麦芽、酸解支链淀粉芽孢杆菌） |
青贮玉米、玉米、玉米蛋白粉、豆粕、小麦、次粉、大麦、高粱、燕麦、豌豆、木薯、小米、大米 |
常用的是α淀粉酶，催化1,4-糖苷键的随机水解 |
根据来源可以在2.5-7.0之间作用 |
α-半乳糖苷酶（产自黑曲霉） |
豆粕 |
可以降解单胃动物不能消化的α-半乳糖苷类低聚寡糖,如棉子糖、水苏糖等,从而提高动物对饲料营养的利用率。 |
- |
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纤维素酶（产自长柄木霉3 、黑曲霉、孤独腐质霉、绳状青霉） |
玉米、大麦、小麦、麦麸、黑麦、高粱 |
降解纤维素中β-1，4糖苷键的总称。 |
PH(3.5-5.5)温度：45-50℃ |
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β-葡聚糖酶（产自黑曲霉、枯草芽孢杆菌、长柄木霉3、绳状青霉、解淀粉芽孢杆菌、棘孢曲霉） |
小麦、大麦、菜籽粕、小麦副产物、去壳燕麦、黑麦、黑小麦、高粱 |
β-甘露聚糖酶(endo-β-1,4-mannanase)是一种新型的酶制剂,属于一种半纤维素酶类,它除具有一般非淀粉多糖(NSP)酶类的作用--降解NSP,降低肠道粘度,促进营养物质的消化和吸收。 |
4.9-7.5,50-70℃ |
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葡萄糖氧化酶（产自特异青霉、黑曲霉） |
葡萄糖 |
分解葡萄糖转化为葡萄糖酸和过氧化氢，杀菌，抑菌，促进肠道及肝脏健康。 |
pH作用范围3.5～6.5，30-60℃。 |
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脂肪酶（产自黑曲霉、米曲霉） |
动物或植物源性油脂或脂肪 |
催化三酰甘油的酯键水解 |
3.5-8.0 35-50℃ |
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麦芽糖酶（产自枯草芽孢杆菌） |
麦芽糖 |
麦芽糖酶（maltase）原来是对可使麦芽糖水解生成2分子葡萄糖的酶所用的名称，但后来一般地是作为作用于结合各种配糖基的α-D-葡萄糖苷的α-葡萄糖苷酶的别名来使用。 |
- |
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β-甘露聚糖酶（产自迟缓芽孢杆菌、黑曲霉、长柄木霉3） |
玉米、豆粕、椰子粕 |
降低食糜粘度 提高饲料转化率破坏植物细胞壁结构改善肠道微生态环境促进机体增长，提高免疫机能 |
5.5 |
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果胶酶（产自黑曲霉、棘孢曲霉） |
玉米、小麦 |
果胶的主要成分是半乳糖醛酸，果胶酶可使得果胶质水解，降低食糜粘度，改善营养吸收，提高利用率 |
3.5-4.5 40-55℃ |
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植酸酶（产自黑曲霉、米曲霉、长柄木霉3、毕赤酵母） |
玉米、豆粕等含有植酸的植物籽实及其加工副产品类饲料原料 |
饲料植酸酶将植酸分解为无机磷，使其直接被动物吸收和利用，从而提高了饲料利用率，减少了动物粪便中磷的排泄，并减少了环境污染。同时，可以减少无机磷的添加，从而降低成本。 植酸酶是一种新型的绿色饲料添加剂，不仅可以减少粪便中磷的排泄对环境的污染，而且还可以缓解植酸的抗营养作用，并提高各种矿物质，蛋白质和氨基酸的利用率。饲料中的酸。 |
2.5-5.5 |
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蛋白酶（产自黑曲霉、米曲霉、枯草芽孢杆菌、长柄木霉3） |
植物和动物蛋白 |
催化分解肽键的一类酶的总称，可将蛋白质降解为小分子的蛋白胨，肽和氨基酸。可提高蛋白质的消化。 |
2.5-8.0 50-55℃ |
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角蛋白酶（产自地衣芽孢杆菌） |
植物和动物蛋白 |
角蛋白酶是一种可专一地降解角蛋白的蛋白酶类，对废弃羽毛的开发、利用具有重要的应用前景，它一方面解决了当前饲料工业中蛋白资源不足的问题，另一方面又可解决环境污染问题。 |
4.0-10.0 40-60℃ |
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木聚糖酶（产自米曲霉、孤独腐质霉、长柄木霉3、枯草芽孢杆菌、绳状青霉、黑曲霉、毕赤酵母） |
玉米、大麦、黑麦、小麦、高粱、黑小麦、燕麦 |
木聚糖酶(xylanase)是指可将木聚糖降解成低聚糖和木糖的一组酶的总称。木聚糖酶可以分解饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖，降低酿造中物料的粘度，促进有效物质的释放，以及降低饲料用粮中的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，并因而更易取可溶性脂类成分。 |
应用pH范围4.5～6.0，最佳5.0;温度范围40℃～60℃,最佳50℃ |
各领域中已经广泛使用的溶菌酶，国家及各行业也先后出台了多个标准对溶菌酶进行规范与监督，包括食品领域的GB 1886.257-2016 《食品安全国家标准 食品添加剂 溶菌酶》、GB/T 25879-2010 《鸡蛋蛋清中溶菌酶的测定 分光光度法》、SN/T 4675.12-2016 《出口葡萄酒中溶菌酶的测定 液相色谱法》。
GB 1886.257-2016与GB/T 25879-2010 都有检测溶菌酶活性的方法，所不同的是GB 1886.257-2016 使用藤黄微球菌作为测试菌株，测定的是作为工业制品的溶菌酶添加剂，不需要测定溶菌酶的含量；而GB/T 25879-2010测定的是鸡蛋清中的溶菌酶，因此GB/T 25879-2010还包含了溶菌酶含量的测试方法，并且在溶菌酶活性的测试中使用溶壁微球菌作为测试菌株。而在SN/T 4675.12-2016 《出口葡萄酒中溶菌酶的测定 液相色谱法》中，则是使用反向液相色谱检测溶菌酶含量，并且强调该方法只能检测溶菌酶含量，与酶的真实活性无关。
在轻工日化领域则有QB/T 5030-2017 《溶菌酶》、GB/T 30990-2014 《溶菌酶活性检测方法》、QB/T 5601-2021 《口腔清洁护理用品 牙膏和口腔清洁护理液中溶菌酶抗菌活性的测定》、WS/T 647-2019 《溶葡萄球菌酶和溶菌酶消毒剂卫生要求》等对溶菌酶活性进行检测。这些标准对于溶菌酶活性的检测也基本依据上述原理。其中GB/T 30990-2014和WS/T 647-2019使用溶壁微球菌作为测试菌株，QB/T 5030-2017则使用藤黄微球菌作为测试菌，其余检测步骤基本相同。而QB/T 5601-2021 则是用活性染料共价标记的藤黄微球菌细胞壁作为底物，用琼脂扩散法进行鉴定。当细胞壁完整性遭到破坏时，就会在琼脂板上形成清晰的透明圈，从而定性鉴定溶菌酶活性的存在。
溶菌酶抑菌能力的指标主要就是看溶菌酶活性。溶菌酶可水解细菌的细胞壁，造成藤黄微球菌、溶壁微球菌等的溶解而引起溶液吸光度值的降低。一个溶菌酶活力单位定义是在25℃，pH在6.2的条件下，让藤黄微球菌或溶壁微球菌悬浊液在450nm处每分钟引起0.001吸光度变化所需溶菌酶的量。
