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文章鉴读|中国农业大学食品科学与营养工程学院 江正强教授:北风类芽孢杆菌木葡聚糖酶的表达、性质及在苹果渣木葡寡糖制备中的应用

文章鉴读|中国农业大学食品科学与营养工程学院 江正强教授:北风类芽孢杆菌木葡聚糖酶的表达、性质及在苹果渣木葡寡糖制备中的应用 食品工业科技编辑部
2025-06-09
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中国农业大学食品科学与营养工程学院,中国轻工业食品生物工程重点实验室,中国农业大学工学院,中原食品实验室,南京财经大学食品科学与工程学院,江苏省现代粮食流通与安全协同创新中心田嘉欣,杨行,赵玉琪,闫巧娟,李延啸,江正强等人重点讨论了功能性寡糖的聚合度对其功能活性的影响,特别是木葡寡糖(XyGOs)的聚合度与其功能活性的关系。章节介绍了酶解法制备木葡寡糖的优势,并指出当前木葡寡糖生产中低聚合度组分(DP 2~4)的缺乏。同时,章节阐述了木葡聚糖酶的来源、分类及其在木葡寡糖制备中的应用,特别是GH74家族木葡聚糖酶在制备低聚合度木葡寡糖方面的潜力。文章还介绍了苹果渣作为制备木葡寡糖的潜在底物,以及利用低共熔溶剂预处理苹果渣的方法。最后,章节描述了本研究通过异源表达北风类芽孢杆菌来源的GH74家族木葡聚糖酶,并研究其酶学性质及在苹果渣水解中的应用,旨在为苹果渣的高值化利用提供理论基础和实践依据。


摘要苹果渣含有丰富的木葡聚糖,是制备具有多种功能活性的木葡寡糖的优良原料,利用新型木葡聚糖酶水解苹果渣有望实现其高值利用。本研究将北风类芽孢杆菌来源的GH74家族木葡聚糖酶基因(PbXEG74B)在大肠杆菌BL21(DE3)中异源表达,对其酶学性质进行表征,进而利用该酶水解苹果渣制备木葡寡糖。结果表明:木葡聚糖酶(PbXEG74B)在大肠杆菌中的表达量为18.0 U/mL。该酶最适pH为5.5,最适温度为55 ℃,在pH4.5~8.5和40 ℃以下具有良好的稳定性。该酶水解木葡聚糖主要产生聚合度2~9的寡糖。在最适条件下,利用PbXEG74B水解低共熔溶剂预处理的苹果渣能够制得聚合度2~9的木葡寡糖,得率为2.79 g/100 g苹果渣,其中聚合度2~4、5~6和7~9的寡糖占比分别为67.0%、11.5%和21.5%。木葡聚糖酶(PbXEG74B)的酶学性质和水解特性优异,在木葡寡糖制备中具有良好的应用潜力,为苹果渣的高值化利用提供了理论基础和实践依据。


PART.01
结果

主要研究了北风类芽孢杆菌木葡聚糖酶XEG74B的表达、性质以及在苹果渣木葡寡糖制备中的应用。重点内容包括:1. XEG74B基因全长3285 bp,编码1094个氨基酸,分子量和等电点分别为114.7 kDa和5.0,属于新型GH74家族木葡聚糖酶。2. XEG74B在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,表达量为18.0 U/mL,纯化后酶活力回收率为51.4%,纯化倍数为2.2。3. XEG74B的最适pH为5.5,最适温度为55℃,具有良好的pH稳定性和温度稳定性。4. XEG74B对木葡聚糖具有较高的比酶活力,为68.4 U/mg,对其他底物活力较低。5. XEG74B能够水解木葡聚糖产生低聚合度的木葡寡糖,属于过程性内切酶。6. 经DESs预处理后,苹果渣中木葡寡糖得率为2.79 g/100 g苹果渣,水解率优于已报道的大部分木葡聚糖酶。7. 利用XEG74B水解苹果渣制备的木葡寡糖中,至少含有15种不同聚合度的木葡寡糖。


图  1   木葡聚糖酶PbXEG74B与其他来源木葡聚糖酶序列比对

Figure  1.   Multiple sequences alignment of PbXEG74B and other xyloglucanases

注:相同的残基在红色背景上显示为白色,保守残基在白色背景上显示为红色,两个保守的催化残基用红色五角星标记。

图  2   PbXEG74B与PoGH74结构比对

Figure  2.   Structural comparison between PbXEG74B and PoGH74

注:催化残基用红色标注;PbXEG74B与PoGH74催化模块(CD)用蓝色和粉色标注;碳水化合物结合模块X2和CBM3分别用紫色和黄色标注。

图  3   木葡聚糖酶PbXEG74B纯化前后电泳

Figure  3.   SDS-PAGE of PbXEG74B before and after purification

注:M:高分子量标准蛋白;1:粗酶液;2:纯酶液。

图  4   PbXEG74B的最适pH(a)、pH稳定性(b)、最适温度(c)和温度稳定性(d)

Figure  4.   Optimal pH (a), pH stability (b), optimal temperature (c) and temperature stability (d) of PbXEG74B

图  5   木葡聚糖(a)、木葡七糖(b)和木葡九糖(c)PbXEG74B水解产物TLC分析

Figure  5.   TLC analysis of XyG (a) , XXXG (b) and XLLG (c) hydrolyzed by PbXEG74B

图  6   未处理(a)和预处理(b)苹果渣的微观结构(2000×)

Figure  6.   Microstructure of untreated (a) and pretreated (b) AP (2000×)

图  7   苹果渣木葡寡糖的组分

Figure  7.   Composition of AP XyGOs

注:CK:未预处理的苹果渣水解8 h;G:葡萄糖;G2:纤维二糖;G3:纤维三糖、G4:纤维四糖;XXXG:木葡七糖;XLLG:木葡九糖。

图  8   苹果渣木葡寡糖的ESI(a)和MALDI-TOF(b)分析

Figure  8.   ESI (a) and MALDI-TOF (b) analysis of AP XyGOs

表  1   PbXEG74B水解苹果渣制备木葡寡糖得率

Table  1   Yield of XyGOs in enzymatic hydrolysis of pretreated AP by PbXEG74B

注:同列字母不同表示差异显著(P<0.05)。


PART.02

思维导图


PART.03

结论

研究成功表达了新型GH74家族木葡聚糖酶XEG74B,并证实其具有良好的酶学性质和水解特性,能高效制备低聚合度的木葡寡糖。应用该酶于苹果渣处理,有效转化为高附加值产品,为苹果渣的高值化利用提供了理论和实践支持。

引用本文田嘉欣,杨行,赵玉琪,等.  北风类芽孢杆菌木葡聚糖酶的表达、性质及在苹果渣木葡寡糖制备中的应用[J]. 食品工业科技,2025,46(11):142−150. doi:  10.13386/j.issn1002-0306.2024060437.


CitationTIAN Jiaxin, YANG Hang, ZHAO Yuqi, et al. Expression and Characterization of Xyloglucanase from Paenibacillus borealis and Its Application in the Production of Xylogluco-oligosaccharides from Apple Pomace[J]. Science and Technology of Food Industry, 2025, 46(11): 142−150. (in Chinese with English abstract). doi:  10.13386/j.issn1002-0306.2024060437.


基金项目国家自然科学基金(22378419)。


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通信作者简介


江正强,男,汉族,博士,中国农业大学食品科学与营养工程学院教授,专业方向:食品生物技术。国家杰出青年基金获得者,入选科技创新领军人才、国家百千万工程有突出贡献中青年专家、国务院政府特殊津贴、科技部中青年创新领军人才、教育部新世纪优秀人才、农业部农业科研杰出人才及其创新团队:农产品生物加工技术创新团队等。中国农业工程学会农产品加工分会理事长、中国生物发酵产业协会常务理事、中国生物发酵产业协会益生制品分会副理事长、中国食品工业协会常务理事等。受邀担任《Biotechnology & Applied Biochemistry》、《Food & Agricultural Immunology》等SCI期刊编委,同时担任《中国粮油学报》、《食品科学》和《中国酿造》编委等。




(以上信息来中国农业大学食品科学与营养工程学院官网


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荟聚食品英才,


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