完成高压氧通过抑制 TLR4/NF-κB 信号通路减轻创伤后继发性脑损伤实验，您还需要一台氧舱！

将60只健康成年雄性SD大鼠随机分为3组：假手术组、未治疗TBI组和高压氧治疗TBI组。使用改良的Feeney自由落体法构建大鼠TBI模型。

使用 4 mg/kg 水合氯醛麻醉大鼠并固定在支架上。皮肤准备后，用骨科钻在冠状缝右侧 3 mm 和矢状缝后 3 mm 处开一个 5 mm 的开口，保持硬脑膜完整。

然后，一个 40 克的物体从 15 厘米高处落下，垂直撞击暴露的硬脑膜，形成一个 3 毫米深、4 毫米直径的孔。假组只是被坠落的物体钻了进去，没有受伤。

在 TBI 后 2 小时进行高压氧治疗 。将大鼠置于动物室中，用纯氧吹扫10分钟，以确保室中的氧气分数> 95％。然后将压力稳定增加到 0.12 MPa 并保持 60 分钟。接下来，压力在 20 分钟内稳定下降至常压。高压氧治疗两次，间隔 10 小时。密切监测大鼠在高压室中的行为。假对照组和未治疗的TBI组也被置于相同的室中并进行相同的实验程序，只是没有进行高压氧处理。

伤后24 h麻醉大鼠，经心尖部注入生理盐水100 ml。切除创伤周围的组织并在-80°C下储存以备后用。使用制造商指示的试剂盒提取核和细胞质蛋白。Bradford法测定蛋白浓度，加入1/4体积的5×上样缓冲液，沸水浴20分钟变性。上样由 35 μg 蛋白质组成的样品，通过电泳分离，转移到膜上，封闭，并与 TLR4、IκB、P65、cleaved caspase-3、GAPDH 或 H3 的抗体（1:200，购自 Santa Cruz , USA) 在 4°C 摇床上过夜，然后洗涤，与相应的 HRP 偶联二抗孵育，并再次洗涤。最后，ELISA 测定 TNF-α、IL-6 和 IL-1β 浓度。