— 2022年度 —
长期炎症性疼痛不影响小鼠的探索行为和压力应对策略
慢性疼痛和精神健康障碍已成为一种严重的合并症。长期疼痛的症状与焦虑和抑郁的症状重叠,例如交感神经兴奋、压力敏感性增加、失眠、食欲变化和疲劳。炎症性疼痛的复杂性尤其包括失调和受损的奖励评估、情绪决策以及身体和心理活动的维持。这种多因素体验可能会增加患者阿片类药物滥用和使用障碍的风险,从而加强了解疼痛如何改变动机和情绪状态的必要性。
实验方法
Experimental method
01
实验动物
将总共 182 只(图S1)雄性野生型 C57BL/6J 小鼠(Jackson Laboratories)以 4 到 5 只一组饲养在标准笼子中,笼子里有玉米芯垫料和筑巢材料,在 12/12 小时的黑暗中/光照循环(早上 7:00 点亮),并在整个实验过程中随意进食。
02
实验设计
在进行任何操作之前,使小鼠习惯于饲养箱 7 天,注射 CFA,并在 4 或 6 周的间隔内每周处理两次以开始行为测试。在行为测试之前,所有小鼠都被证实对处理或环境(摇晃、发声、跳跃)没有表现出明显的压力反应。此外,小鼠在替代生理盐水中进行了测试——CFA 以避免在测试日/会话期间混淆一天中的时间或昼夜节律影响。
实验仪器1
Experimental apparatus
产/品/展/示/
01
强迫游泳测试
用 25°C 的水将 2L 烧杯装满至 1.8L 标记。将小鼠轻轻放入水中,在正常室内照明下强制游泳 6 分钟。完成后,将小鼠轻轻从水中取出,用毛巾擦干,然后将其放在干净、无床上用品的笼子中的加热垫上晾干并恢复。
02
O迷宫实验
将小鼠轻轻放在一只张开的手臂的中心,并在正常室内照明下自由探索 10 分钟。实验者将动物放在仪器上后离开房间。所有试验都以顶视图进行视频记录,使用 Labmaze 跟踪软件进行分析,并通过盲法手动评分确认结果。
03
联合开场(旷场)实验
将小鼠轻轻置于竞技场中央,在昏暗的灯光(约 25 勒克斯)下自由探索 15 分钟。实验者在将动物放入竞技场后离开房间。所有试验都以顶视图进行视频记录,使用Labmaze跟踪软件进行分析,并由失明的手动观察者确认跟踪保真度。
实验仪器2
Experimental apparatus
von-frey纤维丝
足底触痛仪
01
足底热痛觉过敏的 Hargreaves 测试
动物在测试前一天适应 3 × 1 小时的训练,并在测试当天再次适应 1 小时。通过玻璃将辐射热源施加到后爪的足底表面,并记录以秒为单位的缩爪潜伏期。对于注射 CFA 和盐水的小鼠的每只后爪,获得五次测量,试验之间至少间隔 5 分钟。调整光的强度,使对侧/幼稚爪的基线潜伏期约为 12 秒。施加 20 秒的截止时间以防止组织损伤。
02
机械性异常性疼痛的电子von Frey测试
动物在测试前一天适应 3 × 1 小时的训练,并在测试当天再次适应 1 小时。将电子 von Frey 丝 (BioSeb) 通过铁丝网中的间隙施加到后爪的足底表面,并记录后爪收回的力阈值(以克为单位)。对于注射了 CFA 和盐水的小鼠的每只后爪,获得了三次测量,试验之间至少间隔 5 分钟
实验总结
1、持续四到六周的炎症性疼痛不会诱发被动压力应对策略或减少探索行为。
2、持续四到六周的炎症性疼痛不会减少探索行为或诱发运动障碍。
3、颠倒测试顺序时持续四周的炎症性疼痛对探索行为和压力应对策略的影响。
4、探索性行为的测量在新的焦虑环境中的两种行为测试之间并没有可靠的相关性。
5、Hargreaves 测定中的爪子缩回阈值与强迫游泳测试、高架零迷宫和旷场测试中的平均 Z 行为得分无关。
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