我们非常相信荧光多重在Western印迹中的强大功能，这促使了我们的Azure C系列成像仪快速发展。 但是我们认识到，从标准的HRP /化学发光方法迈出来是有些艰巨的，所以我们提出了6个注意事项，使化学发光转换到荧光western blot尽可能简单。
我们还在我们的一些以前的应用中详细介绍了相关内容，例如磷酸/总蛋白检测等等。
1.增加浓度
与化学发光Western blot相比，所需的一抗和二次抗体的浓度可能会增加，这也取决于您使用的成像仪系统。 在更现代或激光成像器中，这种影响可能不太明显。
2.首先进行单色实验测试
首先单独测试您的抗体非常有意义。 这样，您可以确定最佳浓度，在简单的环境中可以把背景或非特异性的因素考虑进去，而不是一次性分析3种不同的一抗和二抗
3.使用吸附性二抗
虽然听起来很简单，但许多人并不考虑他们现在将多种抗体、多个物种加入到单一的印迹中。 如果您在其他领域使用多种荧光，您将已经意识到二抗的交叉吸附，减少物种间交叉反应性的重要性。 但在western中，很多人并不考虑，这是值得检查的，以确保他们达到要求。
4.扩展光谱
三色western blot是令人兴奋，那五种颜色呢。 使用NIR功能，可以大大增加区分不同峰。 显然，这可能需要一些工作进行抗体优化，一次用于5个蛋白的检测可以节省时间和成本花费。
5.检查印迹膜
尽管越来越多的荧光安全膜正在开发中，但一些膜在UV光源暴露下发出自发荧光产生高背景信号。 我们还建议为增加灵敏度，建议从NC膜切换到PVDF膜上，如前所述。
6.为蛋白选择合适的通道
所有的检测通道都不是平等创建的。 对于标准荧光，使用蓝色通道检测您的最高丰度蛋白质，绿色通道检测中等丰度蛋白和红色通道检测低丰度蛋白质。 如果使用NIR，可获得极好的灵敏度和低背景也是低丰度蛋白质的理想选择。
如果您遵循这些提示，并阅读我们的一些应用指南，则从单一到多通道的转变应该非常顺利，如果遇到任何困难，我们随时准备为您提供技术支持。
Azure成像系统
Azure Biosystems生产的新一代多功能分子成像系统是唯一可升级至完成双激光近红外的CCD分子成像系统。Azure Biosystems cSeries成像系统为您提供7款覆盖不同应用的可选机型，您可以选择适应现有需求的一款，后续需求增加升级即可。
Azure Sapphire 双模式多光谱激光成像系统
Azure Biosystems公司是一家创新型服务于生命科学和医学领域的公司，成像产品体现了创新、高技术和颠覆性的精神。在原来C系列成像的基础，我们推出了全新的Azure Sapphire双模式多光谱激光成像系统。
> 4激光激发：488nm（蓝色）、520nm（绿色）、658nm（红色）、785nm（NIR）；
> 唯一的3种检测器设计：PMT、APD和CCD用于信号检测；
> 扫描方式：同时成像，扫描更快速；
> 分辨率更高：可达到10微米的分辨率，成像更清晰；
> 动态范围更宽：同时定量低丰度和高丰度蛋白，定量更准确；
> 双模式成像：具有扫描检测和CCD成像双模式，扫描模式用于荧光检测和磷屏成像，CCD用于高灵敏化学发光成像，实验更多选择。
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