本文核心要点速览：
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法规里程碑：2026年生效的《欧洲药典》2.6.7修订案正式将NAT法提升为与培养法、指示细胞培养法并行的三大核心方法之一，明确其替代合规路径。 |
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技术要求：新版EP强调细胞与上清同检、强制抑制物测试、引入WHO标准品及GC/CFU＜10的参考品标准，使NAT验证更具量化依据。 |
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验证核心：可比性研究是通行证，NAT法灵敏度需达≤10 CFU/mL（替代培养法）或≤100 CFU/mL（替代指示细胞培养法），并完成专属性、耐用性及抑制物测试。 |
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在CAR-T细胞产品的生产质控中，放行质量检测周期与产品生命周期错配始终是质量控制的焦点难题。产品制备已经完成，患者已准备就绪，而支原体检查传统法（培养法）长达28天的检测周期，往往远超细胞治疗产品仅数天的有效期。这一矛盾，在先进治疗药品（ATMPs）领域尤为突出——每延迟一天放行，患者生存窗口就缩小一分。
传统培养法不仅周期长，还存在"活的非可培养状态"（VBNC）支原体漏检风险；指示细胞培养法虽缩短至7-10天，但操作繁琐，时间上仍然无法满足快速放行需求。核酸扩增技术（NAT）的出现，为这一问题提供了技术层面的解决方案。基于支原体特异性DNA序列的扩增与检测，NAT方法可将检测周期缩短至3-5小时，实现真正意义上的“快检放行”。
2026监管新规：
NAT法地位确立与技术框架升级
2026年对于支原体NAT检测而言是关键的历史性节点，欧洲药品质量管理局（EDQM）于2025年5月13日发布官方新闻，确认了EP 2.6.7（12.2版）的修订内容 。根据即将生效的《欧洲药典》（12.2版）2.6.7“支原体（MYCOPLASMAS）”修订案（生效日期为2026年4月1日），NAT法再次明确为与培养法、指示细胞培养法并行的三大核心方法之一。这意味着，在经过充分验证的前提下，NAT法已具备替代传统药典方法的合规基础。
新版EP关于NAT法的主要技术更新包括：
检测范围扩展与分类细化：明确涵盖柔膜体纲（Mollicutes），包括支原体属、脲原体属、无胆甾原体属及螺原体属等，检测范围扩大，分类更细化。
取样策略的科学性提升：强调由于支原体可能附着或存在于细胞内，检测时应同时取样细胞和上清液。
抑制物测试的强制性要求：与培养法一致，指示细胞培养法和核酸法均新增抑制物测试，并提出了具体方案和测试内容，旨在排除产品基质对PCR反应的干扰。
验证标准量化：引入WHO支原体DNA国际标准品作为校准工具，并明确规定GC/CFU比率＜10的参考品接受标准，使NAT结果更具可比性。（更多维度解读，请点击：为什么支原体菌株质量决定了核酸扩增法中LOD是否“真实可信”？）
点击链接了解更多→“EP 2026新版支原体检测要求，从正确取样开始 ——上清&细胞缺一不可”
方法学验证：
NAT快检的合规通行证
对于细胞治疗企业而言，采用NAT方法的核心顾虑在于监管合规性。目前，《欧洲药典》（EP）、《日本药典》（JP）以及《美国药典》（USP）均已收录NAT方法作为支原体检测方法；2025版《中国药典》虽尚未正式收录，但也明确指出“也可采用经国家药品检定机构认可的其他方法”。各国药监机构对支原体检测方法的认可逻辑高度一致：新方法可以接受，但必须证明其不劣于现有方法。
根据2022年国家药监局药审中心发布的《细胞治疗产品药学研究与评价技术指导原则》（试行），在样品量有限或需要快速放行的特殊情况下，如药典方法无法满足，可考虑开发新型检测方法，但必须经过充分验证。NAT法的验证路径主要围绕可比性研究展开，即证明新方法不劣于于或优于传统方法：
完整的验证体系还应涵盖专属性、耐用性、抑制物测试（针对特定产品）以及21 CFR Part 11合规的电子记录管理。
湖州申科支原体NAT检测服务体系
基于上述法规框架与技术逻辑，湖州申科构建了符合中美欧三方药典要求的完整支原体NAT检测与验证服务体系，致力于解决CGT企业“方法建立难、验证周期长、监管沟通成本高”的特点：
平台资质：CNAS认可；BSL-2加强型实验室；
试剂盒性能：MycoSHENTEK®支原体检测试剂盒经三方室间验证，灵敏度可达10 CFU/mL，覆盖支原体及相关菌属约200种；已获得FDA DMF备案（备案号：MF29624）；
验证菌株：所有验证菌株溯源至知名保藏机构，获正式授权，符合EP对菌株参考品GC/CFU比率的要求；
法规解读与监管沟通支持：深度解读中美欧药典差异，协助企业制定最优验证策略；配备具有药检/药监部门沟通经验的技术团队，协助撰写方法学验证及可比性研究方案并完成服务委托，支持现场核查；
项目覆盖：支原体NAT检测与可比性研究服务解决方案已广泛应用于国内成功IND的CGT项目，并助力BLA关键性研究与产品的上市后变更。
实战案例：
已上市CAR-T产品的方法变更
项目背景：
某已上市CAR-T产品，采用MycoSHENTEK®支原体qPCR检测试剂盒实现快速放行。
技术挑战：
• 产品为自体细胞制剂，批次间差异大，基质效应复杂。
• 需证明NAT法对培养法（28天）和指示细胞培养法（7天）的双重替代等效性。
• 验证方案符合法规及监管要求，需通过药检部门的测试复核。
验证路径：
按照EP 2.6.7及国内指导原则，开展方法学验证及可比性研究。同步使用NAT法与传统法对相同样品及菌株进行检测，重点考察方法检测限、专属性及耐用性。
申报结果：
验证方案及报告获监管认可，顺利完成复核检，实现已上市产品由培养法向NAT法的的合规变更。
图1:指示细胞培养法比对
图2:培养法比对（样品+口腔支原体/肺炎支原体培养结果）
从28天到3小时，改变的不仅是时间尺度，更是质控逻辑的迭代。在ATMPs时代，充分验证的NAT方法，正在成为连接产品安全与临床可及性的合规桥梁。
随着EP 2.6.7 (12.2)、USP <77>、ChP 2025等法规的陆续实施，支原体NAT检测已从"替代方法"升级为"核心方法"。对于CGT企业而言，选择具备深度法规理解能力、特定产品验证经验、本土化响应速度的服务商，将是实现合规快检放行的关键。
湖州申科将持续跟踪全球监管动态，以MycoSHENTEK®技术平台为基础，为创新药企提供符合国际最高标准的支原体检测解决方案，助力先进治疗药品的安全、快速上市。
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