多重荧光免疫组化（Multiplex immunohistochemistry，mIHC）是一项基于酪胺信号放大（TSA，Tyramide Signal Amplification）的多重荧光标记技术，利用抗原抗体反应及辣根过氧化酶（HRP）的酶促作用，对样本中多种蛋白标志物进行高密度原位标记的酶学检测。可以实现在同一组织切片上多个靶标蛋白共同染色（最多可实现数十种蛋白的共染色），通过这些靶点的组合和位置关系的研究，进而阐明其相互作用的机理。
PRINCIPLE
mIHC原理
原理：偶联HRP酶的二抗与一抗结合后，临近区域的荧光素标记酪酰胺（Tyramide）生成活化的荧光底物，并与靶标蛋白的酪氨酸共价结合，从而在靶标蛋白处形成高密度荧光信号，将检测信号放大，再通过加热剥离洗去非共价结合的抗体。之后重复操作下一个指标的一抗搭配另一种Tyramide进行染色，如此往复可在同一张切片上实现多指标同时分析。
ADVANTAGE
TSA优势
完美解决荧光双染中一抗来源需不同种属；
信号放大，荧光信号放大的倍数大大增强；
可以对多种蛋白在同一张切片上进行不同荧光标记实现多种蛋白共定位；
更高的灵敏度，可检测传统方法无法检出的低丰度靶标；
节约实验成本，极大地降低抗体用量，提供更高的抗体稀释比例。
APPLICATION
TSA应用
Fig.1 自动组织分割
Fig.2 模拟IHC图像，荧光多重IHC检测
FIg.3在多重和单一上下文中分析ER的表达
mIHC技术可以
①.同时检测多个分子标记物，用于分子分型和亚型的识别；
②.分析不同标记物的表达模式和空间分布，用于肿瘤等疾病的异质性分析；
③.揭示肿瘤细胞特定分子物的表达情况，为肿瘤靶向治疗提供策略；
④.分析细胞对不同药物的敏感性，对药物进行敏感性评估。
酪酰胺信号放大（TSA）技术利用生物素化的或荧光标记的酪酰胺来增加靶蛋白或核酸的检测灵敏度，为蛋白检测提供灵敏度更高、技术更灵活的检测方法，睿捷生物代理的Abcam、SAB、Immunoway等多个品牌可以提供多种酪酰胺信号放大（TSA）系列产品。
参考引文：
Stack EC, Wang C, Roman KA, Hoyt CC. Multiplexed immunohistochemistry, imaging, and quantitation: a review, with an assessment of Tyramide signal amplification, multispectral imaging and multiplex analysis. Methods. 2014 Nov;70(1):46-58.
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