虽然目前已实现无饲养层培养临床级iPSC衍生CD8+ T细胞，但iPSC衍生CD4+ T和Treg细胞的分化则需要在人工胸腺类器官中培养小鼠基质细胞，这使其难以应用于临床开发。
研究思路及实验方案
研究者使用无血清和无饲养层细胞的培养方案，成功地从iPSCs中生成CD4+ T和Treg细胞，为开发iPSC来源的Treg细胞疗法提供潜在方案。
iPSCs的来源和培养
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重编程：从健康人供体获得CD4+CD25+ T细胞并重编程得到iPSCs，将细胞在ReproTeSR™重编程培养基中进行培养，约14天后挑选合适的集落转移至mTeSR™1培养基中培养； -
培养：在Matrigel包被的板上使用mTeSR™1培养基进行iPSCs的培养，使用GCDR解离试剂进行细胞传代，此过程无需饲养层细胞。
HSPCs的生成
T细胞祖细胞的分化
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将HSPCs接种到含有Notch配体的淋巴系分化包被材料（LDCM）上，促进淋系祖细胞的分化； -
随后通过STEMdiff™ T细胞试剂盒进一步分化得到CD4+CD8+双阳性（DP）T细胞，此过程无需血清或饲养层细胞。
CD4 SP T细胞的生成
使用PMA/Ionomycin刺激DP T细胞，诱导其向CD4 SP T细胞分化，此过程无需血清或饲养层细胞，且能够以高效率生成CD4 SP T细胞。
功能性Tregs的生成
研究过程中关键工具
细胞重编程：
ReproTeSR™重编程培养基（产品号 #05926），可用于重编程过程中生成iPSCs；
细胞培养：
细胞解离：
HSPCs生成：
STEMdiff™ APEL™2分化培养基（产品号 #05270），成分确定、无血清且无动物源成分，用于将iPSCs分化为造血干祖细胞（HSPCs）；
CD4+CD8+ DP T细胞生成：
Tregs生成：
ImmunoCult™ 人Treg分化添加物（产品号 #10977）和ImmunoCult™ 人CD3/CD28/CD2 T细胞激活剂（产品号 #10970）等将CD4 SP T细胞转化为FOXP3+ Tregs。
iPSC衍生细胞的分子特征
通过层次聚类对5个样本中的差异表达基因进行全局比较显示，iPSC-CD4 SP T细胞的转录谱与原代CD4 Tconv更相似（图1A）；另外，研究者检测了样本中核心Treg基因标记的表达（图1D），结果发现iPSC-Treg与原代Treg和iTreg相似，但在基因表达方面存在一些差异，例如FOXP3和CTLA4表达上调， TNFRSF1B表达下调。
iPSC衍生细胞的功能评估
研究者用CD3/CD28/CD2激活剂激活iPSC-CD4 SP T细胞，在24小时和48小时观察到激活标志物CD25和PD-1的表达增加。激活后的 iPSC-CD4 SP T细胞分泌IL-2、TNF-α、IL-4和IL-10，但不分泌IFN-γ。
总结
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* 请勾选调节T细胞
参考文献
1. Fong H, Mendel M, Jascur J, et al. A serum- and feeder-free system to generate CD4 and regulatory T cells from human iPSCs. Stem Cells. 2025;43(3):sxaf001. doi:10.1093/stmcls/sxaf001
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