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Seahorse XF 实验常见问题及解答

Seahorse XF 实验常见问题及解答 睿捷生物
2023-06-16
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导读:1.可以使用失效(超出保质期)的探针板或重复使用吗?安捷伦无法保证因使用超出保质期的探针板或重复使用探针板而



1.可以使用失效(超出保质期)的探针板或重复使用吗?

安捷伦无法保证因使用超出保质期的探针板或重复使用探针板而得到的实验数据质量(有效性),为得到最佳最真实的数据,请使用有效期内的探针板及其他消耗品。


2.探针板水化超出水化时间怎么办?

安捷伦建议将探针板放入37℃无CO2培养箱中水化过夜以得到最优结果。最短水化时间是37℃水化4小时,但是为得到最佳数据不建议采用这么短的时间。探针板最长水化时间是37℃水化72小时,但由于液体蒸发需要补充(或更换)水化液,因此37℃无CO2培养箱务必放置水盘保证湿度。


3.Fluxpak和探针板有什么区别?

探针板是Fluxpak的组成部分,一个Fluxpak包含探针板、水化板、水化液和细胞培养微孔板。以上各消耗品数量因所购Fluxpak类型而不同。探针板不能单独订购,必须定购Fluxpak来购买。但细胞培养板可单独购买。


4.一次实验可以只使用探针板的其中一部分吗?

为了将所有药物或化合物成功地注入细胞培养孔中,安捷伦建议水化整个探针板并因需要将相同字母标注的全部加药仓注入药物(请参考实验流程中关于加载药物的注意事项)。


5.实验中为何必须设置空白/背景校正孔?

空白孔/背景校正孔被用来过滤掉实验的干扰因素,比如温度和bufferingcapacity,这些干扰因素会影响氧含量和pH变化(非来源于代谢变化的影响)。背景校正孔还能被用来修正整板间温度波动,来诊断潜在温度问题,作为实验获得非期望数据时的原因筛查的切入点。


6.为何细胞培养板需要在37℃无CO2培养箱中放置45-60min?

细胞培养板在37℃无CO2培养箱中孵育45-60min的目的是为了脱气,释放CO2。


7.SeahorseXF报告生成器中的代谢数据是如何计算的?

在每个试剂盒的SeahorseXF报告生成器的用户指南中详细列出了数据的计算公式,请参阅。


8.请问进行FAO实验时,能够在探针板上加载BSA-palmitate使其在上机测量时自动注射入细胞孔吗?

安捷伦建议将BSA-palmitate或相似底物在培养细胞时做预处理。如果实验存在合理依据需在上机测量时通过注射加入BSA-palmitate、血清或其他类似底物,请联系相关技术支持。


9.使用组织黏附剂处理细胞培养板会影响XF实验测量吗?

不会。使用诸如poly-L-Lysine, fibronectin, Gelatin, poly-D-lysine, and Cell TakTM等组织黏附剂处理细胞培养板时,不会影响XF仪器测量的效果及实验参数分析。


10.XF96细胞培养微孔板的每个细胞孔的最大体积是多少?

275µL。


11.SeahorseXF检测液中需要加入抗生素吗?

无需加入抗生素,因为大部分XF实验在几小时内就结束了。


12.可以在seahorse检测液中加入血清吗?

不建议加入血清(如:FBS),因为其会影响检测液的缓冲能力,并可能与进行检测的药物/化合物发生非特异性结合而影响检测效果。另外,使用加入血清的检测液溶解药物加载至探针板加药仓中进行注射时,会出现注射失败的情况。


13.加入底物的检测液在多长时间内可保持稳定?或可以提前配好检测液吗?

安捷伦建议Seahorse检测液在实验当天现用现配。


14.可以购买试剂盒中同名称的其他厂家的药物自配进行代谢检测吗?

建议使用seahorse配套试剂盒进行检测,安捷伦所有试剂盒均经过了能量代谢实验的质量校验及功能验证,可保证实验数据的质量,且分析非期望数据时更容易更便捷,节省时间。


15.SeahorseXF糖酵解压力试剂盒中的药物状态看上去很奇怪,是否有质量问题(或其他试剂盒中部分药物)?

如Glycolysis stress test kit中的2-DG,该药可能是透明的液体、不透明的(白色的)固体,也可能是白色固体与透明液体的混合物,以上药物状态均不影响其性能,可按照说明书正常溶解使用。


16.为何使用自购的glucose、pyruvate和glutamine与Seahorse XF base medium配制检测液时,调节pH时要加很多NaOH,且pH变化非常慢?

可能是由于glucose、pyruvate和glutamine中存在一些杂质,比如缓冲成分,导致加入NaOH后pH变化较慢。


17.为何不能使用XF base medium配制的检测液进行Glycolytic rate与real-time ATP rate两个实验?

XF base medium中含有酚红,该物质会影响这两个实验的测量。


18.为何不能使用GlutaMAX来代替Glutamine呢?

不建议使用GlutaMAX来配制检测液。因加入GlutaMAX后,还需细胞进一步将其转化为Glutamine,这可能会影响线粒体对Glutamine氧化的动力学过程。


19.检测液的pH对XF实验非常重要吗?

是的,SeahorseXF实验通过测定细胞代谢物(如:氧和质子)的变化来确定OCR和ECAR,而检测液pH会影响这些代谢的产生或消耗,因此保持检测液一致的pH(37℃,pH=7.4)非常重要。


20. FluxPak中的水化板可以替代细胞培养板吗?

不可以,虽然水化板与细胞培养板结构相同,但不能用来培养细胞。


21.Seahorse 探针板上机前加药,需要注意什么?

加药时同样方法,枪头抵着加药孔壁大约与水平面呈45°度角,将液体一次性加入到加药孔中,注意板子始终保持在平面上,加完药的探针板不能晃动,以免加入的液体漏入水化板中。(在加药前需要取下粉色的水化辅助板)


22.Seahorse数据分析软件WAVE可以免费下载安装吗?

是的,可在安捷伦官网找到WAVE下载网址(下一部分内容也列出),并且免费下载安装。


23.Seahorse XF 仪器模板选项中没有想检测试剂盒的模板怎么办?

可在桌面板wave软件中将相应实验模板先导出到 U 盘中,再导入XF 仪器模板库即可。


24.Seahorse数据分析软件导出选项中没有Seahorse real-time ATP rate assay report generator?

当软件导出选项中无相应的report generator时,请移步到Agilent官网细胞分析软件下载页面下载对应试剂盒的report generator。


25.Seahorse Wave 分析软件,我的电脑怎么都安装不上,怎么办?

当软件无法安装时,可采用 Seahorse Analytics云分析, 这是一款网页形式的 Seahorse XF 数据分析软件,用户可以通过任何一台电脑安全地存储、访问和分析数据。极大地简化了用户的数据分析流程

(https://www.agilent.com/zh-cn/product/cell-analysis/real-time-cell-metabolic-analysis/xf-software/agilent-seahorse-analytics-787485)


26.Seahorse XF 相关试剂盒的说明书在哪呢,有中文的吗?

 Agilent 一直提倡遵循环保理念,当您收到试剂盒后,标签面都有一个二维码,扫描即可下载说明书。部分有中文说明书,请联系相关技术支持索取。


27.Seahorse XFe24 组织胰岛板能简单介绍下吗?

目前只有XFe24机型配有组织胰岛微孔板,其微孔板的腔室容积为16.6 µL;

其网状捕获筛孔径为125 µm。



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睿捷生物科技有限公司是 (realgen-bio Co., Ltd.,简称睿捷生物)致力于为国内生命科学领域提供先进、专业的仪器设备、试剂耗材的企业。公司目前是近20家国际知名生物公司的一级代理商,为客户提供从研发到生产的各类实验室仪器,检测试剂和生产设备。


公司产品领域涵盖分子生物学、免疫学、血液学、肿瘤研究、信号通路、药物筛选、干细胞研究、神经生物学、表观遗传学等等,为用户提供系统性的科学研究完整解决方案,成为众多研究者们可以信赖的选择。


公司成立于2011年,总部位于苏州,在上海、南京、济南、合肥都设有办事处,公司客户主要为国内领先的生物制药、细胞治疗、生物医学和各类生物技术公司,以及大量的生命科学基础研究和政府实验室,目前已服务客户单位5000余家。



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