Agilent | “智”在未来：安捷伦自动化成像平台为神经突生长分析赋能- 大数跨境

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Agilent | “智”在未来：安捷伦自动化成像平台为神经突生长分析赋能

睿捷生物

2024-11-28

导读：Cytation 最强大脑上线，助力研究者实现神经突生长分析

内容摘要

突触生长试验能够为发育生物学、神经毒性、退行性疾病以及神经再生研究等领域中神经元模型的关键表型变化提供深刻见解。

自动化方法凭借提高通量、效率及可重复性，推动了神经突起生长研究的进步。

安捷伦 BioTek 自动化成像仪与 Gen5 软件的突触分析功能相互结合，能够实现针对多种突触生长实验方法的高通量研究。

多模态神经突起生长试验可以提供有关药物治疗后复杂生长效应的协同和互补性见解。

神经突生长分析自动化解决方案

实验设计

神经元培养

培养 iPSC 诱导的神经元(FUJIFILM iCell GlutaNeurons)。常规 2D 实验，以每孔 10,000 个细胞的密度将神经元接种于包被 poly-ornithine 的 96 孔微孔板(Greiner)。3D 实验组则以每孔 3,000 个细胞的密度将神经元接种在 96 孔球型培养板(Nunc)中。

冷冻保存的小鼠皮层神经元(Gibco)在 BrainPhys 培养基(StemCell Technologies)中培养，在包被 poly-ornithine 的 96 孔微孔板(Greiner)上以约 10000 个细胞/孔的密度接种。

神经元标记

固定神经元细胞，使用 β-III-tubulin (Invitrogen)，MAP2和DAPI (Invitrogen)进行标记。使用 Calcein green AM (Invitrogen)和 Hoechst 33342 对活体神经元球体进行标记。

成像

在 Agilent BioTek Cytation 5 细胞成像多功能微孔板检测系统和 Agilent BioTek BioSpa 8 自动化培养箱组成的智能活细胞工作站上进行活细胞实时成像。在 Cytation 5 成像仪上进行固定细胞成像，在 Cytation C10 共聚焦成像系统进行 3D 活细胞生长监测。

分析

图像采集和数据分析通过安捷伦 BioTek Gen5 神经突起生长模块进行。

结果与讨论

非标记动力学神经突生长

分析方法：

Cytation 5 and BioSpa 8 automated incubator

神经元于 96 孔微孔板中培养，并在五天内每隔三个小时进行一次成像。

针对四种处理在六个浓度下的活细胞动力学展开分析。

自动化标记成像与数据分析

Figure 1. Agilent BioTek imagers support two label-free imaging techniques for live-cell neuron analysis.

实时活细胞成像动态定量神经突起生长

Figure 2. Detailed kinetic analysis of neuron culture outgrowth assessed by total neurite length across five days in culture.

药物作用时间：生长率变化分析

Figure 3. Differences in drug effect timing established through kinetic analysis. The maximum rate of change in outgrowth is determined by Gen5 software analysis and highlighted for each drug. Data points represent mean and SEM for replicate conditions (n =3).