
Immunoway重磅推出的精品重组兔单抗、病理级鼠单抗、多重荧光试剂盒等系列产品,能高效帮助勤恳的科研小伙伴们在实验中得到理想的荧光图像。镜下分析染色定位、表达趋势等信息与预期完美一致,却因缺乏专业的分析工具而不知如何科学量化阳性信号、细胞数量或荧光强度。


点击Process→Binary→Fill Holes将信号点补充为完整的细胞(若荧光信号饱满填充细胞没有空腔,可省略此步骤)。
运行后得到一张各信号点标记序号的图像,“Results”是每个计数点的详细信息,“Summary”是计数后的总数据,导出表格进行分析。
对于信号比较密集或模糊,阈值处理后信号成团不便自动计数的图像,可在步骤1后直接单击Point,手动标记每一个细胞信号进行计数,每个点在图像上都呈现出对应的序号。
在手动Point选择目标信号结束后,点击Analyze→Measure得到计数值。
1、数据处理不仅仅是对软件操作的掌握,从样品制备到成像,各环节对数据分析都至关重要。阈值设定会对图像进行分割和圈定,因此成像时尽量轮廓清晰、目的信号清晰、背景低;切片或培养细胞时尽量避免样品区域重叠干扰成像效果。
2、图片上的比例尺会干扰荧光数据分析,因此储存图片时注意避免比例尺的存在,比例尺可以在最后作图时根据一张已加比例尺且放大倍数一致的图片来进行校准添加。
3、如果图像荧光亮度过强,在处理过程中会损失亮度信息,导致分析数值出现偏差,因此在成像时注意图片的荧光强度。
4、成像的曝光时长、分析时的阈值设定等因素都会影响荧光数值,为了确保数值的可信度,在成像和分析时,组内和组间的设定值需要保持一致避免人为干扰。
5、荧光成像储存图像要注意保存为无损压缩格式(如TIF格式),常用的JPG是有损压缩格式。
小伙伴们若有其他感兴趣的ImageJ荧光分析需求,欢迎留言!小编将精选整理,解锁更多实用技巧哦~~
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