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Immunoway | 科研神器-保姆级教程之ImageJ分析荧光强度/计数

Immunoway | 科研神器-保姆级教程之ImageJ分析荧光强度/计数 睿捷生物
2025-12-25
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Immunoway重磅推出的精品重组兔单抗、病理级鼠单抗、多重荧光试剂盒等系列产品,能高效帮助勤恳的科研小伙伴们在实验中得到理想的荧光图像。镜下分析染色定位、表达趋势等信息与预期完美一致,却因缺乏专业的分析工具而不知如何科学量化阳性信号、细胞数量或荧光强度。






Nature评为科研圈十大代码之一的ImageJ兼顾了强大的功能和简单操作,可以对细胞或荧光点进行计数、分析组织形态和共定位、测量细胞大小和神经元长度、分析灰度值、量化荧光强度等,是科研党必备的香香工具!


福利来啦,本文手把手带您用ImageJ搞定荧光分析,准备一张无损图片(如tif格式),打开ImageJ软件,开干!!!

image.png








一、荧光强度分析

01

首先File→Open打开需要分析的图片。

02

多通道Merge的图片,点击Image→Color→Split Channels,将图片拆分成单通道图像,选择具体需要分析的图片进行下一步操作。

image.png

03

本文以绿色荧光图像为例,点击Image→Adjust→Threshold,勾选Dark Background,选择需要设定的阈值,将目标区域精准分割出来。

image.png
04
手动调节横条阈值范围或选择最适的阈值算法(蓝色线框),使红色区域与目的信号尽量完全吻合。

05

点击Analyze→Set Measurement勾选需要分析的数据。

image.png
06

运行Analyze→Measure,得到计算结果,导出数据或复制粘贴到表格做后续统计分析,其中荧光强度Mean = IntDen/Area。



二、荧光计数

01

打开需要计数的图片,操作同上,将多通道图片拆分为单通道。

02

Image→Adjust→Threshold,勾选Dark Background,选择需要设定的阈值,使目的信号与红色尽量完全吻合,可同时打开一张原图(左图)作为调整(右图)的对照。

image.png
03

点击Apply,得到黑白二级图片(Fill Holes只对黑白图像进行空洞填充)。

04

点击Process→Binary→Fill Holes将信号点补充为完整的细胞(若荧光信号饱满填充细胞没有空腔,可省略此步骤)。


05

点击Process→Binary→Watershed将粘连成团的细胞信号分开,将图像放大,可看到处理后的粘连细胞团信号被断开(右图)。


 
06
点击Analyze→Analyze Particles,设置细胞大小Size,选定需要分析的数据。

07

运行后得到一张各信号点标记序号的图像,“Results”是每个计数点的详细信息,“Summary”是计数后的总数据,导出表格进行分析。


8-1

对于信号比较密集或模糊,阈值处理后信号成团不便自动计数的图像,可在步骤1后直接单击Point,手动标记每一个细胞信号进行计数,每个点在图像上都呈现出对应的序号。


8-2

在手动Point选择目标信号结束后,点击Analyze→Measure得到计数值。





注意事项

1、数据处理不仅仅是对软件操作的掌握,从样品制备到成像,各环节对数据分析都至关重要。阈值设定会对图像进行分割和圈定,因此成像时尽量轮廓清晰、目的信号清晰、背景低;切片或培养细胞时尽量避免样品区域重叠干扰成像效果。



2、图片上的比例尺会干扰荧光数据分析,因此储存图片时注意避免比例尺的存在,比例尺可以在最后作图时根据一张已加比例尺且放大倍数一致的图片来进行校准添加。



3、如果图像荧光亮度过强,在处理过程中会损失亮度信息,导致分析数值出现偏差,因此在成像时注意图片的荧光强度。



4、成像的曝光时长、分析时的阈值设定等因素都会影响荧光数值,为了确保数值的可信度,在成像和分析时,组内和组间的设定值需要保持一致避免人为干扰。



5、荧光成像储存图像要注意保存为无损压缩格式(如TIF格式),常用的JPG是有损压缩格式。







小伙伴们若有其他感兴趣的ImageJ荧光分析需求,欢迎留言!小编将精选整理,解锁更多实用技巧哦~~

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产 品 示 例













CD8 a (PT0117R) PT™ Rabbit mAb,货号:YM8067

Ki-67 (PT0321R) PT™ Rabbit mAb, 货号:YM8189

CD38 (PT0361R) PT™ Rabbit mAb, 货号:YM8214

鼠 兔 三 标 四 色 荧 光 检 测 试 剂 盒, 货号:RS0035













α-SMA (PT0074R) PT™ Rabbit mAb,货号:YM8040

CD31  (PT0141R) PT™ Rabbit mAb, 货号:YM8079

鼠 兔 双 标 三 色 荧 光 检 测 试 剂 盒,  货号:RS0036


多色试剂盒
货号
产品名称
规格
RS0035
鼠兔三标四色荧光试剂检测盒 1mL 2mL 5mL
RS0036
鼠兔双标三色荧光检测试剂盒 1mL 2mL 5mL
RS0037
鼠兔四标五色荧光检测试剂盒 1mL 2mL 5mL
RS0038 鼠兔五标六色荧光检测试剂盒 1mL 2mL 5mL
RS0039
鼠兔六标七色荧光检测试剂盒
1mL 2mL 5mL
RS0111
兔三标四色荧光检测试剂盒
1mL 2mL 5mL
RS0112
兔双标三色荧光检测试剂盒
1mL 2mL 5mL
RS0113
兔四标五色荧光检测试剂盒
1mL 2mL 5mL
RS0114
兔五标六色荧光检测试剂盒
1mL 2mL 5mL
RS0115
兔六标七色荧光检测试剂盒
1mL 2mL 5mL
RS0116
鼠三标四色荧光检测试剂盒
1mL 2mL 5mL
RS0117
鼠双标三色荧光检测试剂盒
1mL 2mL 5mL
RS0118
鼠四标五色荧光检测试剂盒
1mL 2mL 5mL
RS0119
鼠五标六色荧光检测试剂盒
1mL 2mL 5mL
RS0120
鼠六标七色荧光检测试剂盒
1mL 2mL 5mL


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关于睿捷生物科技有限公司



睿捷生物科技有限公司是 (realgen-bio Co., Ltd.,简称睿捷生物)致力于为国内生命科学领域提供先进、专业的仪器设备、试剂耗材的企业。公司目前是近20家国内外知名生物公司的一级代理商,为客户提供从研发到生产的各类实验室仪器,检测试剂和生产设备。


公司产品领域涵盖分子生物学、免疫学、血液学、肿瘤研究、信号通路、药物筛选、干细胞研究、神经生物学、表观遗传学等等,为用户提供系统性的科学研究完整解决方案,成为众多研究者们可以信赖的选择。


公司成立于2011年,总部位于苏州,在南京、济南、合肥都设有办事处,公司客户主要为国内领先的生物制药、细胞治疗、生物医学和各类生物技术公司,以及大量的生命科学基础研究和政府实验室,目前已服务客户单位4000余家。


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睿捷生物是一家专注于生命科学领域的仪器、试剂、耗材供应商。公司代理 Abcam,Stemcell,Brand,Abmole,Agilent,SAB等10余家欧美著名生物技术公司的试剂仪器耗材。
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