WB是研究蛋白分子最成熟，应用最广泛的技术之一。现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。
首先通过聚丙烯酰胺凝胶电泳将蛋白样品按分子量进行分离
通过转膜将电泳分离后的蛋白分子转移到固相载体PVDF或NC膜上
用特异性结合的一抗、二抗对靶蛋白进行标记
最后通过化学显色或荧光成像分析着色位置和深浅判断目标蛋白质在所分析样品中表达情况
每个实验者都希望得到干净漂亮符合预期的WB条带。然而，好看的结果千变一律，令人崩溃的数据总是各有各的特色。尤其是历经千辛万苦解决了高背景，表达趋势等问题后，却发现条带呈现一头强一头弱，或中间断开的哑铃状……
那么，蛋白条带呈现哑铃状的原因是什么？怎样才能避免这类情况的出现呢？
1、首先判断是否同一张膜上孵育的所有不同靶标蛋白条带都呈现哑铃状，首要考虑配制的凝胶不合格，或样品含有不溶解物质导致孔中蛋白分布不均匀，并做对应的实验调整。
2、大多数的情况是同张膜上某个靶点的条带呈哑铃状，而其他条带均匀，这种情况常出现在信号比较弱的条带中，靶蛋白表达丰度低或者是上样量不足是造成这一现象的关键因素。特别注意在电泳上样时确保样品均匀轻柔的落在孔中，而不是对着孔底的某一处猛力加样，此外，对于低丰度蛋白应可适当增加蛋白上样量以避免因信号较弱再次出现条带间断的情况。
3、上样体积也是影响条带的因素之一。比如，1.5mm厚的15孔胶，每孔最大上样体积可达到30μL左右，适用大多数指标的最佳上样体积一般不要超在5~15μL。过多的上样体积容易溢出或使泳道拥挤，体积太小容易导致条带不均匀。
4、最好在样品变性前通过蛋白定量，调整每个样品的变性蛋白浓度一致，以便控制每个样品的上样体积和上样量相差不大，避免相邻泳道的蛋白浓度或体积相差较大的因素引起的条带变形。
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