血液作为最易获取的样本来源之一,是免疫和非免疫细胞的重要来源,其可直接用于生物检测分析,也可以进一步处理以分离特定的细胞亚群。制备血液样本时,选择合适的实验方案和技术可以简化血液处理步骤、提高实验室效率并减少操作失误的风险,有助于确保下游检测获得准确的结果。
血液和血液衍生产品的起始样本可以有多种来源,常见的人血液样本来源主要分为未处理样本和处理后的血液样本,包括循环血液(全外周血)、骨髓、脐带血、白膜层、单采术产品。
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01
< 外周血 >
简单来说全血就是指血液,由血细胞+血浆组成,正常人全血的组成成分:
红细胞: 血液中数量最多的一种血细胞;
白细胞(CD45+):包括淋巴细胞,单核细胞,粒细胞,B细胞,NK细胞,天然免疫细胞等;
血小板: 可与凝血因子一起,对血管受伤而出血的部位进行反应,进而形成凝块;
血浆: 绝大部分是水,其中溶解的物质主要是血浆蛋白、葡萄糖、无机盐、激素以及二氧化碳。
血液离开人体后,一般建议不超过24h,进行下游实验。通常在取外周血时要选择一个合适的抗凝管从而保证下游实验效果最佳,一般临床上使用的抗凝剂包括:肝素,EDTA和枸橼酸,对于单核细胞等髓系细胞实验,推荐EDTA抗凝管;肝素保存的血液在48h时,能够保持较好的状态,但EDTA抗凝剂不行,如果不能拿到新鲜的血液,建议抗凝剂可以从EDTA更换成肝素。
02
< Bone Marrow(骨髓) >
骨髓样本的成分包括:成熟的基质细胞和基质干细胞;造血干细胞/干祖细胞;成熟中或已经成熟的红细胞和白细胞;正常健康人能取得5-10x10^6 MNC/mL骨髓。
骨髓的存储:一般人的骨髓样本短时间存储在室温即可,骨髓样本存在大量的脂肪,4度存储容易造成聚团。
03
< Cord Blood(脐带血) >
脐带血一般通过密度梯度离心法获得,密度梯度离心之前要使用含有2%FBS的PBS稀释Cord Blood,并进行血小板去除操作(120g 低速离心10 min)。
如果下游要进行细胞分选操作,要使用有核细胞液计数,调整细胞分选在准确的密度,吸取的单个核细胞中可能会有不成熟的红细胞中残留,不过并不影响后续的EasySep细胞分选,因为分选试剂中包含anti-GlyA抗体。
04
< Buffy Coat(白膜层) >
Buffy Coat直接通过对血液进行离心获得,一般收集的百分比占全血的20%,也就是加入10 mL全血,能够收集到2mL的Buffy Coat样本。白细胞中各免疫细胞的比例和全血相似,红细胞和白细胞的比例是50-150:1(全血是1000:1)。
05
< 5.Leukopak/Leukaphresis(白细胞单采术)>
白细胞单采术一般使用特殊的机器收集供者的白细胞,并将其它血细胞通过循环返回供者体内。多用于白细胞大量富集的样本或者稀少细胞的提取,在动员外周血分离造血干细胞时,也会使用白细胞单采术。
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