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同仁化学 | 溶酶体研究全攻略

同仁化学 | 溶酶体研究全攻略 睿捷生物
2026-02-26
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导读:🔬 实验技术干货溶酶体研究全攻略从原理到实操,一文搞定溶酶体检测的所有难题溶酶体是细胞的"回收站",负责分解


🔬 实验技术干货

溶酶体研究全攻略

从原理到实操,一文搞定溶酶体检测的所有难题

溶酶体是细胞的"回收站",负责分解生物分子、管理细胞器质量。它与神经退行性疾病、铁死亡等密切相关,是当下生命科学研究的热点。但很多小伙伴在实际操作中总会遇到各种问题——溶酶体怎么染色?pH怎么测?中性化怎么做?今天这篇推文,帮你一次性解决所有困惑!

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📌 为什么溶酶体这么重要?

溶酶体不只是个"分解工厂",它还参与:

  • 细胞内信号传导 — 维持细胞稳态

  • 铁代谢调控 — 与铁死亡密切相关

  • 细胞器质量控制 — 损伤蛋白和细胞器的清除

Nature Neuroscience (2022) 和 Nature Communications (2025) 的最新研究都指出:溶酶体功能障碍与神经退行性疾病、铁死亡的发生发展密切相关。

阿尔茨海默病的病因是大脑中绽放的“毒花而B-淀粉样蛋白的积累不过是其结果而已。

刺激引起的铁在细胞内分布的变化与铁死亡  (文末有相关结果图)

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🔬 溶酶体功能评估指标

想要全面评估溶酶体功能,需要关注以下几个核心指标:

评估指标清单
溶酶体数量(数量、面积)
溶酶体pH(约pH 4~5)
溶酶体相关蛋白量(LAMP1 / LAMP2)
溶酶体酶活性(Cathepsin B/L/D)
膜完整性(LMP: Lysosomal Membrane Permeability)
运输·融合能力(Endolysosomal trafficking)
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⚗️ 溶酶体中性化怎么做?

溶酶体中性化是研究溶酶体功能的常用手段。最常用的方法是使用Bafilomycin A1抑制V-ATPase,阻止H⁺进入溶酶体,导致内腔pH上升。

推荐条件

项目
推荐条件
注意事项
浓度
10 – 50 nmol/l
pH测定时用低浓度
时间
30 – 120 min
短时间处理
高浓度
100 nM / ≥ 6 h
会引起线粒体损伤
重要提醒
24小时以上的Bafilomycin A1处理不再是溶酶体抑制实验,而是细胞毒性评估!做溶酶体功能研究时,务必控制浓度和时间。
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🎨 溶酶体数量检测实战

推荐试剂:LysoPrime系列

LysoPrime Green / Deep Red
不易受溶酶体pH变化影响
对溶酶体特异性高
在溶酶体中滞留性高(可染色过夜)
📝 实验步骤(活细胞成像)
1将细胞接种于培养皿,37℃、5% CO₂培养
2去除培养基,用HBSS或无血清培养基洗涤2次
3加入LysoPrime工作液(Green 1:2000稀释 / Deep Red 1:1000稀释),37℃孵育30分钟
4去除上清,用HBSS或无血清培养基洗涤2次
5加入培养基,荧光显微镜观察
关键要点
1. 务必使用不含血清的溶液配制染料
2. 染色后再进行药物刺激
3. 不推荐染色后固定(会改变溶酶体定位)
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🌡️ 溶酶体pH检测秘籍

推荐试剂:pHLys系列

pHLys Green / Red
可高灵敏度检测溶酶体pH
对溶酶体特异性高
在溶酶体中滞留性高(可染色过夜)
核心技巧
仅凭单一染料的荧光强度,无法区分是溶酶体数量变化还是pH变化!建议同时检测数量和pH,才能准确解析溶酶体功能。

🎯 同时检测方案

双染实验流程
1先用 LysoPrime Deep Red 染色(检测数量,不易受pH影响)
2洗涤后,用含Baf.A1的 pHLys Green 染色(检测pH,对pH敏感)
3共聚焦显微镜下同时观察两个通道
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📊 产品选择指南

检测目标
产品名称
荧光特性
数量
LysoPrime Green (L261)
Ex. 488 / Em. 500-600
LysoPrime Deep Red (L264)
Ex. 633 / Em. 640-700
pH
pHLys Red (L265)

Ex. 561 / Em. 560-650
pHLys Green
 (L268套装内含)
Ex. 488 / Em. 490-550
pH+数量
Lysosomal Acidic pH Detection Kit(L266&L268)
Green/Red&Green/Deep Red双染
点击了解详情
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📝 核心要点总结
中性化:用Bafilomycin A1,推荐50 nmol/l处理30 min,避免高浓度长时间
数量检测:选LysoPrime系列,不易受pH影响,特异性高
pH检测:选pHLys系列,对pH敏感,建议与数量检测联用
染色要点:无血清配制、染色后刺激、不推荐固定
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🔬 最新研究应用

1. 细胞老化研究

用Doxorubicin诱导A549细胞老化,发现SA-βGal活性增加的同时,溶酶体pH变得更酸性。

用Doxorubicin(DOX)刺激A549细胞诱导细胞衰老后,检测细胞内衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)和溶酶体量与pH的变化。用细胞衰老检测试剂盒—Cellular Senescence Detection Kit - SPiDER-βGal(货号:SG03)检测细胞衰老,分别用LysoPrime Deep RedpHLys Red(货号:L265)检测溶酶体的量和pH的变化。荧光显微镜的观察结果发现伴随着细胞衰老的发生,三个检测指标均有上升。另外,通过酶标仪的数值化的检测,也得到了相同的检测结果。


2. 铁死亡研究

RSL-3诱导铁死亡时,溶酶体Fe(II)增加和溶酶体肥大化同时发生,提示溶酶体铁在铁死亡中的关键作用。

溶酶体亚铁离子探针:Lyso-FerroRed(货号:L270)


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关于睿捷生物科技有限公司



睿捷生物科技有限公司是 (realgen-bio Co., Ltd.,简称睿捷生物)致力于为国内生命科学领域提供先进、专业的仪器设备、试剂耗材的企业。公司目前是近20家国内外知名生物公司的一级代理商,为客户提供从研发到生产的各类实验室仪器,检测试剂和生产设备。


公司产品领域涵盖分子生物学、免疫学、血液学、肿瘤研究、信号通路、药物筛选、干细胞研究、神经生物学、表观遗传学等等,为用户提供系统性的科学研究完整解决方案,成为众多研究者们可以信赖的选择。


公司成立于2011年,总部位于苏州,在南京、济南、合肥都设有办事处,公司客户主要为国内领先的生物制药、细胞治疗、生物医学和各类生物技术公司,以及大量的生命科学基础研究和政府实验室,目前已服务客户单位4000余家。


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睿捷生物是一家专注于生命科学领域的仪器、试剂、耗材供应商。公司代理 Abcam,Stemcell,Brand,Abmole,Agilent,SAB等10余家欧美著名生物技术公司的试剂仪器耗材。
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