张椿翊1,2 邓乔晟1 郭子晗1 乔中华1 黄小兰2 王 森3 周 游1∗ 周 浓1∗
1 重庆三峡学院生物与食品工程学院
2 重庆市万州食品药品检验所
3 遵义医科大学药学院
桑枝，又称桑条，为桑科植物桑Morus alba L.、鸡桑M. australis Poir.和华桑M. cathayana Hemsl.的干燥嫩枝。桑枝性平，味微苦，归经肝，是一种传统的中药材，具有祛风湿，利关节作用，主要用于治疗风湿麻痹以及手臂肩膀等处关节麻木酸痛等症状，历代古籍记载桑枝可“疗口干、养津液、滋肾水”，具有燥湿、活血通经的治疗功效，在我国中医临床应用上已有十分悠久的历史。桑枝中具有多种有效活性成分，如黄酮类成分、生物碱类成分、氨基酸等，据现代药理研究表明，桑枝具有抗炎、抗氧化、降血糖、降血脂、降血压、抗菌抗病毒以及抗肿瘤等多种作用。桑枝黄酮类成分具有良好的降血脂降血糖以及抗菌抗氧化等作用。
本研究以采自重庆不同区县的9个产地、3个种类、共计18批次的桑枝作为实验样品，通过超声波提取，采用超高效液相色谱法(ultra performance liquid chromatography,UPLC)对这18批不同种类桑枝中芦丁、桑色素、山柰酚、异槲皮苷、桑辛素等五种黄酮类成分含量进行测定与分析，以此来对9个产地、3个种类的18批桑枝进行质量分析，比较出18批桑枝中黄酮含量的差异性，为后续的桑枝研究开发提供数据支撑及参考。
提取条件的选择。本研究考察了甲醇加热回流提取法、甲醇超声波提取法、乙醇加热回流提取法、乙醇超声波提取法，发现以甲醇为提取溶剂的效果较佳，加热回流提取法和超声波提取法提取效果相差不大，考虑到超声波提取法操作简单，故本研究选用了甲醇超声波提取法。本研究同时考虑了提取温度、提取时间、提取次数对提取效果的影响，最后试验结果表明当提取温度为25℃ 、提取时间为30min、提取次数为2次时，整体的提取效果最佳，所以本实验最后的提取条件确定为用甲醇溶液以超声波的提取方式，提取温度为25℃ 、提取时间为30min、提取次数为2次。
流动相的选择。本研究考察了四种流动相组成(0.2％甲酸水溶液+甲醇、0.2％甲酸水溶液+乙腈、0.2％磷酸水溶液+甲醇、0.2％磷酸水溶液+乙腈)对出峰效果的影响差异，实验结果显示，当流动相为0.2％甲酸水溶液+甲醇和0.2％磷酸水溶液+甲醇时，出峰时间较晚，分析时间较长，特别是桑辛素，在流动相为甲醇时出峰时间靠后，影响整体的分析时间，当流 动相为0.2％磷酸水溶液+乙腈时分析时间较短，峰形以及分离效果较好，所以本研究选用0.2％磷酸水溶液+乙腈作为流动相。同时还考察了不同的柱温(30、35、40℃)对试验效果的影响，试验结果发现当柱温为35℃时分离效果最佳。
桑枝黄酮成分含量情况。研究结果显示，18批桑枝样品中均检出芦丁、异槲皮苷、桑色素、山柰酚、桑辛素，但在含量上存在较大差异，含量最高的桑辛素平均含量为135.154μg/g，含量最低的山柰酚平均含量为6.929μg/g，提示桑枝(特别是南岸区黄桷垭镇的华桑)可作为桑辛素来源材料进行提取，进一步开发利用。桑枝中的这5种黄酮含量受较多因素的影响，如桑枝的采收时间、桑树的种类、桑枝的部分(前段、中段、后段)、桑枝的产地等等。桑辛素具有抗艾滋病病毒和抗肿瘤的作用。桑色素和异槲皮苷都具有抗氧化活性，能清除DPPH自由基活性。芦丁能使毛细血管的弹性增强的效果，能够保护多种组织器官，在细胞凋亡的过程中起到诱导作用。山柰酚对癌症细胞有较好抑制作用，和芦丁一样，在细胞凋亡过程中通过诱导作用使其凋亡，具有防癌抗癌的作用。综上所述，桑辛素、桑色素、异槲皮苷、芦丁、山柰酚均具有很好的药用价值，对临床医疗具有十分重要的意义。桑树资源在三峡库区种植面积广泛，获取方便，原料获取成本较低，以桑枝为原料来提炼桑辛素、桑色素、异槲皮苷、芦丁、山柰酚等黄酮成分，将会是桑枝进一步开发利用的新趋势。该研究成果发表在《天然产物研究与开发》2023年第3期，欢迎引用(点击左下方“阅读原文”可查看全文)。
引用格式：张椿翊,邓乔晟,郭子晗,等.UPLC法同时测定不同种类桑枝中5种黄酮类成分含量[J].天然产物研究与开发,2023,35:372-378. Zhang CY,Deng QS,Guo ZH,et al.Simultaneous determination of five flavonoids in different mulberry branches by UPLC[J].Nat Prod Res Dev,2023,35:372-378.
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