李振雨1,2 刘晓霞1,2 冯涌微1,2 位翠杰1,2 何民友1,2 邓淙友1,2 陈向东1,2∗ 孙冬梅1,2
前言
汤剂经过几千年的用药实践，目前仍为中药临床用药的主要剂型，随着社会的发展和科技的进步，汤剂被赋予新的“内涵”，中药“标准汤剂”也应运而生。中药标准汤剂是参考传统中药汤剂煎煮方式，采用标准化煎药模式制备得到的一种标准物质，可标化中药临床用药，规范中药配方颗粒等新型中药饮片在临床上的使用，为中药配方颗粒、经典名方制剂等产品的研发提供参考。
姜黄为姜科植物姜黄Curcuma longa L.的干燥根茎，具有破血行气，通经止痛的功效，为临床常用的中药。姜黄中的主要化学成分为酚类和萜类， 此外，还含有少量的生物碱、黄酮、甾醇类，其具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗糖尿病、保肝、降血脂等作用。目前姜黄药材主要分布于四川、云南和陕西等地区，四川、云南为姜黄药材的道地产区和主产区，市场供应均以栽培为主，野生资源少，难以形成规模。目前对姜黄的质量评价多集中在对姜黄素类成分和挥发油的分析测定上，对其他类型成分的研究较少。
随着现代分析技术的发展，中药质量控制取得了较大的进步，指纹图谱/特征图谱、一测多评、多成分定量、多组分薄层鉴别等质量控制模式的应用使得中药的“整体质量控制”理念越来越清晰。本次研究通过建立姜黄标准汤剂UPLC指纹图谱结合化学计量学分析，寻找差异性质量标志物，并结合多成分定量分析，为姜黄标准汤剂及其相关制剂的鉴别和质量控制提供参考。
含测指标的选择。姜黄素类和挥发油是姜黄的主要活性成分之一，但是上述成分水溶性较小，标准汤剂以水为溶剂，水溶性成分应是汤剂发挥药效的重要物质基础，因此，在标准汤剂质量标准研究中，除了测定姜黄素类成分，同时增加了阿魏酸的测定，与姜黄素类成分相比，阿魏酸的水溶性相对较好，是姜黄素类成分的合成前体，同时在标准汤剂煎煮过程中，姜黄素类成分亦能转化为阿魏酸，现代药理学研究证实，阿魏酸具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗血栓、降血脂、降低心肌缺血和耗氧量等作用，其药用价值越来越受到重视，标准汤剂中阿魏酸的量，反映了标准汤剂煎煮过程中姜黄化学成分的变化。对以“标准汤剂”为基准的中药配方颗粒等现代中药制剂生产工艺的优化，具有较强的指导意义。
分析方法的建立。姜黄标准汤剂中化学成分极性差异较大，既有姜黄素等脂溶性较大的活性成分，又有阿魏酸等水溶性较大的成分，因此，指纹图谱的建立需要最大限度地将上述成分提取出来，同时又要考虑将不同极性的化学成分进行很好的色谱分离，并建立与指纹图谱条件一致的多成分定量方法。因此，我们对流动相系统、检测波长和供试品溶液制备方法进行了系统的考察，确定最佳的色谱条件和供试品溶液制备方法。
指纹图谱和含量测定结果评价。16批姜黄标准汤剂指纹图谱与对照指纹图谱相似度均在0.95以上，说明指纹图谱整体相似度较高，能够用于姜黄标准汤剂的鉴别和质量控制。相似度计算能够反映指纹图谱峰的稳定组成和特征比例，但是，无法完整描述和区分指纹图谱中所包含的复杂成分的分布规律和相互作用关系，因此，采用化学计量学中的模式识别方法对指纹图谱进行研究，结果显示，16批姜黄标准汤剂样品具有一定的产地产异性，以10个共有峰峰面积为变量，HCA和PCA均将16批样品分为两类，其中四川产区样品归为一类，云南产区样品归为另一类，共找到6个差异性标志物，分别为峰、峰(阿魏酸)、峰8(双去甲氧基姜黄素)、峰9(去甲氧基姜黄素)、峰2(香兰素)和峰1(对羟基苯甲醛)，其中峰5经过高分辨质谱指认，推测可能为1-(4-羟基-3,5-二甲氧基苯基)-7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-1,4,6-庚三烯-3-酮，目前缺少对照品，有待于进一步研究与确证。通过对阿魏酸、双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素和姜黄素的含量进行测定，结果显示，云南大理的姜黄原料制备的标准汤剂姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素及阿魏酸的含量均高于四川宜宾和乐山的样品，这也为企业生产时原料的选购提供参考。
目前，对姜黄指纹图谱和含量测定的研究较多，但主要集中在对挥发油和姜黄素类成分的表征和测定上，而对水溶性相对较大的成分研究不足，本次研究通过建立姜黄标准汤剂UPLC指纹图谱并同时对4种有效成分进行测定，为姜黄药材质量标准完善，以及姜黄中药配方颗粒和经典名方制剂等产品质量标准的建立提供重要的参考。该方法操作简便，稳定可靠，重复性良好。该研究成果发表在《天然产物研究与开发》2023年第5期，欢迎引用(点击左下方“阅读原文”可查看全文)。
引用格式：李振雨,刘晓霞,冯涌微,等.姜黄标准汤剂UPLC指纹图谱的建立和4种成分定量分析研究[J].天然产物研究与开发,2023,35:807-818. Li ZY,Liu XX,Feng YW,et al.Establishment of UPLC fingerprint and quantitative analysis of four components of Curcumae Longae Rhizoma standard decoction[J].Nat Prod Res Dev,2023,35:807-818.
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