梁月仪 李振雨* 吕渭升 卢晓莹 杨 洁 刘晓霞 位翠杰 孙冬梅
广东一方制药有限公司 广东省中药配方颗粒企业重点实验室
前言
浙贝母被列为“浙八味”之首，历版《中华人民共和国药典》(后文简称《中国药典》)均有收载，为百合科植物浙贝母Fritillaria thunbergii Miq.的干燥鳞茎，在初夏植株枯萎时采挖，洗净，润透，切厚片，干燥；习称“浙贝片”。浙贝母具清热化痰止咳、解毒散结、消痈之功，临床用于治疗风热、痰火咳嗽、肺痈、乳痈、疮毒等症。
湖北贝母为百合科植物湖北贝母Fritillaria hupehensis Hsiao et K. C. Hsia的干燥鳞茎，主要功效是清热化痰、止咳、散结，临床多用于治疗肺热咳嗽、热痰咳嗽等症，浙贝母与湖北贝母同属贝母属，均可作中药材贝母入药；二者有效成分均为生物碱类物质，但其种类不同。浙贝母的主要有效成分包括贝母素甲、贝母素乙、异贝母甲素等，湖北贝母主要有效成分包括贝母素甲、贝母素乙、湖贝甲素、湖贝乙素、湖贝辛等；故浙贝母与湖北贝母的药理作用也存在一定不同。2020年《中国药典》一部药材项下将浙贝母和湖北贝母分别单列，表明两种药材存在一定的差异。
由于市场上贝母类品种多而杂，且价格差别大，浙贝母、湖北贝母存在互相代替或者以伪替真的现象。由于性状、显微和理化鉴别的局限性，无法将两种药材质量的异同点，进行很好的展现，故需建立一种专属性、准确度更好的方法将两者进行有效的区分与鉴别。
讨论与结论
在指纹图谱的建立和应用上，针对浙贝母和湖北贝母生物碱类成分的特点，通过色谱条件优化和供试品溶液考察建立浙贝母和湖北贝母HPLC-ELSD指纹图谱，相似度评价结果显示，同一种贝母指纹图谱相似度较高，因此，指纹图谱可作为共性特征，用于浙贝母和湖北贝母的质量控制研究。而对比两种贝母指纹图谱的差异可知，浙贝母指纹图谱明显缺少湖贝甲素色谱峰或者湖贝甲素含量极低，在浙贝母中不易检出。因此，湖贝甲素可以作为两种贝母的差异性标志物，用于浙贝母和湖北贝母的区分和鉴别。
以共有峰的峰面积为变量，分别进行HCA、PCA和OPLS-DA分析，HCA和PCA结果均能将浙贝母和湖北贝母进行有效地区分和鉴别，表明采用指纹图谱、HCA或PCA相结合的方式，是鉴定浙贝母和湖北贝母的有效手段，为进一步阐明两种贝母在化学成分上的异，采用OPLS-DA分析共找到4个差异标志物，根据差异显著性排序，分别为贝母辛>峰4>湖贝甲素>贝母素乙，说明两种贝母在上述成分的含量上存在较大的差异，这种差异一方面由药材本身的基原不同导致，也可能与药材的种植环境、生长周期等因素密切相关。
含量测定指标的选择方面，浙贝母与湖北贝母中含有的生物碱类主要分为异甾类生物碱和甾体类生物碱。研究发现，生物碱类成分具有祛痰、止咳、平喘、抗炎、抗肿瘤等多种药理活性，与浙贝母、湖北贝母功能主治相一致。从浙贝母、湖北贝母HPLC-ELSD指纹图谱中指认了5种相同的生物碱类，含量测定结果表明，两种贝母中除伊贝辛成分含量差异较小，其余4个成分贝母辛、贝母素甲、贝母素乙和异贝母甲素含量均差异较大，其中浙贝母中贝母素甲的含量明显高于湖北贝母，而贝母辛、贝母素乙、异贝母甲素的含量明显低于湖北贝母，因此，通过测定贝母辛、贝母素甲、贝母素乙和异贝母甲素的含量也能区分浙贝母和湖北贝母，含量测定的研究结果基本与OPLS-DA分析结果基本一致。有文献报道，生物碱类成分的含量和比例的不同，可能是导致两种贝母止咳化痰、抑菌、抗炎药效差异的重要因素，通过对多种生物碱的同时测定，对于以临床为导向的中药浙贝母和湖北贝母的质量控制和评价具有重要意义，因此，建议在浙贝母和湖北贝母药材质量控制中增加贝母辛、异贝母甲素的测定。
引用格式：梁月仪,李振雨,吕渭升,等.基于HPLC-ELSD指纹图谱和多成分定量的浙贝母与湖北贝母质量差异研究[J].天然产物研究与开发,2023,35:1101-1111. Liang YY,Li ZY,Lyu WS,et al.Quality difference between Fritillariae Thunbergii Bulbus and Fritillariae Hupehensis Bulbus based on HPLC-ELSD fingerprints and multi-comonent quantitative analysis[J].Nat Prod Res Dev,2023,35:1101-1111.
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