刘燎原1,2 洪婉敏2 张志鹏2 张 正2 程钰洁2 黄 瑶2 徐 杰2 孙冬梅2*
1 广东省中医药研究开发重点实验室
2 广东一方制药有限公司 广东省中药配方颗粒企业重点实验室
鲜益母草为唇形科植物益母草Leonurus japonicus Houtt.的新鲜地上部分，春季幼苗期至初夏花前期采割。性微寒，味苦、辛，能活血调经、利尿消肿、清热解毒，临床多用于治疗月经不调、痛经经闭、恶露不尽等病症。中药鲜用历史悠久，《中华人民共和国药典》1963年版、2000~2020年版均收载了鲜益母草。此外，药典中收载鲜用中药如鲜石斛、鲜芦根、鲜地黄、鲜鱼腥草、牡荆叶及生姜。鲜益母草在古今均有丰富的临床用药经验，其现代应用如国家医保目录甲类产品鲜益母草胶囊，已成为重点城市公立医院终端妇科用药产品前20中的首位；林良国医生在《鲜益母草临床应用》一文记载鲜益母草在妇科疾病、心脑血管疾病以及泌尿系统疾病上的诸多临床应用；郝近大所著的《鲜药的研究与应用》一书中亦详细记载了鲜益母草的搭配煎煮入药等临床应用情况。鲜益母草在《金匮要略论注》《证类本草》等24本古籍中均有相关处方入药的记载。鲜药能有效避免因经加工前处理造成的成分损失或改变的弊端，保留“原生药材”的特性，由于传统鲜药长期存在贮藏困难、缺味频繁、临床调剂不便、剂型单一等问题，且没有形成适应时代需求和中医药特色的规模化产业，使鲜药难以在临床上广泛使用。
中药配方颗粒是在中医药理论指导下，将原药材按炮制规范制成中药饮片进行投料，以水作为溶媒进行煎煮、浓缩、干燥、制粒等生产工序，最终制备得到可供临床配方使用的颗粒制剂。与传统汤剂相比，中药配方颗粒能与传统汤剂饮片的药味、药性及汤剂药效基本一致，又具有携带方便、安全有效等特点，是“源于饮片，高于饮片”的现代中药新型汤剂。近年来，作为传统饮片的另一种补充形式，中药配方颗粒以其特有的优势逐渐覆盖各医疗机构，并在临床中得到一定的使用效果。通过规范化的生产工艺将鲜益母草制成中药配方颗粒，不仅能有效保留鲜益母草鲜用的特性，并且能解决运输储藏困难、调剂使用不便的问题。同时，根据《关于结束中药配方颗粒试点工作的公告》指示，为了保障鲜益母草配方颗粒的产品质量和市场供应，需建立鲜益母草配方颗粒的法定标准。因此，参照杨立伟等提出“基于标准汤剂的中药整体质量控制模式”以及国家药典委员会发布的《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求》，本研究收集了20批不同产地鲜益母草药材，制备标准汤剂，并以鲜益母草标准汤剂出膏率、指标成分含量、特征图谱三大指标为基准，建立鲜益母草配方颗粒质量标准，以期为鲜益母草配方颗粒国家标准的制定提供参考。
本研究采用检测波长320、277、254nm，色谱峰峰型、分离度均无明显差异，277nm色谱峰吸收强度高，因此波长选择277nm。比较3种不同流动相；采用乙腈-0.1%醋酸水为流动相，峰型较差，采用乙腈-0.1%甲酸水溶液，盐酸益母草碱峰不对称，峰型较差，采用乙腈-0.1%磷酸水为流动相的洗脱效果较好，色谱图基线平稳，峰型较好，确定0.1%磷酸水为流动相。耐用性考察在不同的流速下，各特征峰与S峰的相对保留时间RSD值<2.5%，部分色谱峰相对峰面积RSD值为1.8%~12%，表明流速±0.02 mL/min的改变对相对峰面积影响较大，建议固定流速为0.25mL/min；在不同的柱温下，各特征峰与S峰的相对保留时间RSD值<1.62%，相对峰面积RSD值为1.5%~8.6%，表明当柱温±2℃的改变对相对峰面积影响较大，建议控制柱温为30℃。不同类型色谱柱各特征峰差异较大，其中Aglient SB C18虽然对峰4~6的分离度较好，但其余色谱峰分离度差，Waters CORTECS UPLC T3 Column对峰5、6(盐酸益母草碱)分离度差，Waters ACQUITY HSS T3对各色谱峰的分离效果均较好，因此特征图谱的色谱柱固定为ACQUITY UPLC HSS T3 Column(2.1mm×100mm,1.8μm)。
20批鲜益母草标准汤剂波动范围在4.43%~8.02%，平均出膏率为5.53%，SD为1.03%，出膏率范围应在4.0%~8.5%。鲜益母草配方颗粒干浸膏的出膏率范围为5.0%~8.5%。鲜益母草配方颗粒的质量标准在标准汤剂的基础上，分别建立鲜益母草中盐酸益母草碱和盐酸水苏碱含量测定的方法。鲜益母草的化学成分包括生物碱类、萜类、黄酮类、苯乙醇苷和挥发油类成分等，其中生物碱类是其主要的活性成分，研究最多的是生物碱类成分中的盐酸益母草碱、盐酸水苏碱等，具有双向调节子宫、利尿、活血止血、抗炎镇痛等作用，与鲜益母草临床功效“活血调经、利尿消肿、清热解毒”相一致。其中，20批鲜益母草标准汤剂盐酸益母草碱含量波动范围2.11~9.05mg/g，平均含量为4.93mg/g，SD为1.86mg/g，对应的鲜益母草配方颗粒盐酸益母草碱的标准范围：每克含盐酸益母草碱应为1.0~5.3mg。20批鲜益母草标准汤剂盐酸水苏碱含量波动范围16.86~82.59mg/g，平均含量为40.58mg/g，SD为18.91mg/g，对应的鲜益母草配方颗粒盐酸水苏碱的标准范围：每克含盐酸水苏碱应为9.0~60.0mg。通过对20批不同产地样品分别建立了鲜益母草饮片、标准汤剂的特征图谱，选取了8个共有峰，并对放大生产的三批次鲜益母草饮片、标准汤剂、配方颗粒特征图谱的相对保留时间及相对峰面积进行量值传递分析，确保对鲜益母草配方颗粒的整体性质量控制。20批次鲜益母草的峰1相对峰面积中的具有一定规律性，可对峰1的差异成分进行相应的规定，20批次标准汤剂峰1相对峰面积的均值为0.329，以均值的70%即0.230作为下限，可进一步规定鲜益母草配方颗粒中峰1的相对峰面积应不得低于0.23。
在此基础上，本课题组前期也对鲜益母草和益母草配方颗粒药效学开展相关的研究，发现鲜益母草配方颗粒对降低热毒血瘀证大鼠的TXB2、6-keto-PGF1α含量的活血功效优于益母草配方颗粒，两者均能增加水负荷大鼠的尿液量，提高心钠素含量，鲜益母草配方颗粒还能降低抗利尿激素含量，利尿作用相对更优。综上，本研究中鲜益母草配方颗粒的制备工艺基本可行，所建立的鲜益母草配方颗粒质量标准合理，可为鲜益母草配方颗粒国家标准的制定提供数据支撑。该研究成果发表在《天然产物研究与开发》2024年第10期，欢迎引用(点击左下方“阅读原文”可查看全文)。
引用格式：刘燎原,洪婉敏,张志鹏,等.基于标准汤剂的鲜益母草配方颗粒质量标准研究[J].天然产物研究与开发,2024,36:1761-1776. Liu LY,Hong WM,Zhang ZP,et al.Study on the quality standard of fresh Leonurus japonicus Houtt. formula granules based on standard decoction[J].Nat Prod Res Dev,2024,36:1761-1776.
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