茯苓皮与白茯苓中三萜类成分的HPLC特征图谱与化学模式识别研究- 大数跨境

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茯苓皮与白茯苓中三萜类成分的HPLC特征图谱与化学模式识别研究

天然产物研究与开发

2023-09-28

导读：本研究建立了茯苓皮与白茯苓中三萜类成分的HPLC指纹图谱，并对其化学识别模式进行了分析。

占慧慧1,2,3 丁婵1,2,3 彭思源1,2,3 刘媛1,2,3 孟俊华1,2,3 肖作为1* 崔培梧1,2,3*

1 湖南中医药大学药学院

2 国家中医药管理局中药药性与药效三级科研实验

3 湖南中医药大学菌物药研究室

前言

茯苓又名茯菟、茯灵、松腴等，系多孔菌科真菌茯苓Poria cocos (Schw.) Wolf的干燥菌核，味甘、淡，性平，归心、肺、脾、肾经，有利水渗湿、健脾宁心的功效。茯苓收载于《中华人民共和国药典》(简称《中国药典》)2020年版一部，是中药四君八珍之一，有“十方九苓”之称。茯苓的主要药效物质是茯苓多糖和茯苓三萜，现代药理学研究表明，茯苓三萜具有利尿、抗肿瘤、免疫调节、抗炎、抗衰老、降血糖和调血脂等作用，是当前用于表征茯苓质量和效应的重要指标。目前市场流通的茯苓主要为栽培品种，不同的产地、加工方式、饮片规格等都可能影响茯苓药材和饮片的质量。2020年版《中国药典》仅采用薄层色谱法鉴别控制茯苓和茯苓皮药材的质量，难以全面反映其质量的优劣。指纹图谱研究是现代中药领域内普遍被认可、应用较广泛的中药质量控制方法之一，具有整体性高、特征性强等优势，符合中药多成分综合作用的特点，有进一步鉴别、鉴定和分类的潜力。化学模式识别可对指纹图谱的多维信息进行分析，准确反映药材的质量差异，从而达到整体描述和合理评价药材质量的目的。本研拟究建立茯苓皮(源于茯苓菌核表皮)与白茯苓(源于茯苓菌核去皮后的部位)的 HPLC指纹图谱，并结合模式识别手段分析各共有峰对指纹图谱的作用，找出其中的主要峰和特征峰，从整体上评价茯苓皮和白茯苓中各化学物质的差异，为茯苓药材的质量控制提供依据。

代表性结果

讨论与结论

本研究采用甲醇为提取溶剂、超声处理30min的样品提取方法，考察了不同流动相(乙腈-水、乙腈-0.1%甲酸水、乙腈-0.1%磷酸水、乙腈-0.2%磷酸水、乙腈-0.3%磷酸水)，不同色谱柱[Agilent 5 TC-C18(2)(250mm× 4.6mm,5μm)、Welch Ultimate XB-C18(250mm×4.6mm,5μm)、Agilent Eclipse Plus C18(250mm×4.6mm,5μm)]，不同体积流量(1.0、1.1、1.2mL/min)，不同色谱柱温度(22、25、28℃)，不同采集波长(203、210、242nm)对指纹图谱的影响，最终确定色谱条件为流动相为乙腈-0.3%磷酸水，Agilent 5 TC-C18(2)(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱，体积流量为1.0mL/min，色谱柱温度25°C，变波长方式采集，此条件下基线平稳，色谱峰峰形较好，分离效果较佳。

在此基础上采用HPLC法建立了14批来自不同产地的茯苓皮与白茯苓指纹图谱，在茯苓皮与白茯苓指纹图谱的共有模式下共标定了15个共有峰，并通过化学对照品指认了其中6个化学成分：茯苓新酸B、去氢土莫酸、茯苓新酸A、去氢茯苓酸、茯苓酸、松苓新酸。通过14批不同产地茯苓皮和白茯苓样品聚类分析树状图和峰面积折线图结合相似度数据可知不同药用部位的茯苓样品组间差异较大，组内差异较小，白茯苓样品与产地的关联性较强。因此模式识别采用无监督的PCA方法，PCA结果将15个共有峰变量分成2个主成分Y1和Y2，Y1是包括去氢土莫酸、去氢茯苓酸、茯苓酸成分在内的7个共有色谱峰的综合反应，表明7个共有色谱峰在进行茯苓皮与白茯苓指纹图谱研究时必不可少；Y2是包括茯苓新酸B、茯苓新酸A、松苓新酸成分在内的8个色谱峰的综合反应，提示这8个色谱峰可作为在同时评价茯苓皮与白茯苓质量时茯苓皮的特征鉴别峰。对指纹图谱影响较大的共有峰变量参数为1、2(茯苓新酸B)、7号色谱峰。白茯苓这15个共有峰成分间含量差异比茯苓皮小。实际上白茯苓这15个共有峰成分含量都远低于茯苓皮，为了使茯苓皮与白茯苓指纹图谱的共有模式更完整和可测故而在制备白茯苓时加了一步浓缩步骤。

研究表明本文建立的方法简便、可靠、准确，可以为茯苓皮及白茯苓的质量评价、标准的制定及药材的合理利用提供参考依据。该研究成果发表在《天然产物研究与开发》2023年第9期，欢迎引用(点击左下方“阅读原文”可查看全文)。

引用格式：占慧慧,丁婵,彭思源,等.茯苓皮与白茯苓中三萜类成分的HPLC特征图谱与化学模式识别研究[J].天然产物研究与开发,2023,35:1469-1479. Zhan HH,Ding C,Peng SY.et al.Study on HPLC fingerprint and chemical pattern recognition of triterpenoids in Poriae Cutis and White Poria[J].Nat Prod Res Dev,2023,35:1469-1479.